[发明专利]使用双重SHRNA的增强的免疫细胞及包含免疫细胞的组合物

权利要求书

1.一种载体，其包含：

编码两种类型的短发夹RNA(shRNA)的碱基序列，所述短发夹RNA抑制至少一种削弱免疫细胞功能的基因的表达，和

编码嵌合抗原受体(CAR)或单克隆T细胞受体(mTCR)的碱基序列。

2.根据权利要求1所述的载体，其中所述两种类型的shRNA的表达的特征在于它们分别由两种不同的启动子调控。

3.根据权利要求2所述的载体，其中所述两种启动子是RNA聚合酶III启动子。

4.根据权利要求2所述的载体，其中所述两种启动子是源自不同物种的U6启动子。

5.根据权利要求2所述的载体，其中所述两种启动子在所述载体上彼此以不同的方向取向。

6.根据权利要求1所述的载体，其中所述削弱所述免疫细胞功能的基因是免疫检查点受体或配体。

7.根据权利要求6所述的载体，其中所述免疫检查点受体或配体选自由以下组成的组：PD1、PD-L1、CTLA4、TIM3、CEACAM(CEACAM-1、CEACAM-3或CEACAM-5)、LAG 3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、CD96、MerTK和2B4。

8.根据权利要求1所述的载体，其中所述削弱所述免疫细胞功能的基因选自由以下组成的组：FAS、CD45、PP2A、SHIP1、SHIP2、DGKα、DGKζ、Cbl-b、CD147、LRR1、TGFBR1、IL10Rα、KLGR1、DNMT3A和A2aR。

9.根据权利要求1所述的载体，其中所述两种类型的shRNA靶向削弱所述免疫细胞功能的单个基因，或者其中所述两种类型的shRNA靶向削弱所述免疫细胞功能的不同基因。

10.根据权利要求1所述的载体，其中所述两种类型的shRNA靶向PD-1。

11.根据权利要求1所述的载体，其中在所述两种类型的shRNA中，i)一种shRNA靶向PD-1，并且第二种shRNA靶向TIM-3，或者ii)一种shRNA靶向PD-1，并且第二种shRNA靶向TIGIT。

12.根据权利要求1所述的载体，其中在所述两种类型的shRNA中，编码一种shRNA的所述碱基序列包含选自由SEQ ID NO：2-219组成的组的序列，并且编码第二种shRNA的所述碱基序列包含选自由SEQ ID NO：2-219组成的组的不同序列。

13.根据权利要求1所述的载体，其中所述CAR或mTCR的靶标是在癌细胞、癌组织和/或肿瘤微环境中表现出增加的表达的人肿瘤抗原，或者是在癌细胞、癌组织和/或肿瘤微环境中发现的抗原的突变形式。

14.根据权利要求1所述的载体，所述载体是否包含SEQ ID NO：220或221的碱基序列。

15.根据权利要求1所述的载体，其中所述载体是质粒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关载体或逆转录病毒载体。

16.一种包含权利要求1所述的载体的免疫细胞，其中所述一个或多个基因的表达与在所述shRNA不存在的情况下的表达相比减少至40％或更少。

17.根据权利要求16所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是人来源的T细胞或天然杀伤(NK)细胞。

18.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-17中任一项所述的免疫细胞。