[发明专利]重组人唾液酸酶、唾液酸酶融合蛋白及其使用方法在审
| 申请号： | 201980017083.6 | 申请日： | 2019-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN112135904A | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 彭力;曹立志;徐丽慧 | 申请（专利权）人： | 帕利昂制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C07K16/28;C07K19/00;A61P35/00;A61K38/47 |
| 代理公司： | 北京安杰律师事务所 11627 | 代理人： | 杨剑;吴立 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 唾液酸 融合 蛋白 及其 使用方法 | ||
1.一种重组突变人唾液酸酶，所述唾液酸酶包含N-端和C-端，并包含：
(a)至少一个野生型半胱氨酸残基的替换；
(b)至少一个野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶增加了所述唾液酸酶的等电点(pI)和/或降低了所述唾液酸酶的疏水性；
(c)在所述唾液酸酶的N-端处与N-端氨基酸共价结合的长度为至少两个氨基酸残基的肽；
(d)至少一个野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶增加了所述唾液酸酶的N-与C-端之间的疏水相互作用和/或氢键结合；和/或
(e)在所述唾液酸酶的N-端处N-端甲硫氨酸的替换或缺失。
2.一种重组突变人唾液酸酶，所述唾液酸酶包含N-端和C-端，并包含：
(a)至少一个野生型半胱氨酸残基的替换；
(b)至少一个野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶增加了所述唾液酸酶的等电点(pI)和/或降低了所述唾液酸酶的疏水性；
(c)在所述唾液酸酶的N-端处与N-端氨基酸共价结合的长度为至少两个氨基酸残基的肽；和/或
(d)至少一个野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶增加了所述唾液酸酶的N-与C-端之间的疏水相互作用和/或氢键结合。
3.权利要求1或2所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶选自Neu1、Neu2、Neu3和Neu4。
4.权利要求3所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶是Neu2。
5.权利要求1-4中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含半胱氨酸残基的替换。
6.权利要求5所述的唾液酸酶，其中所述半胱氨酸残基是游离半胱氨酸残基。
7.权利要求5或6所述的唾液酸酶，其中所述半胱氨酸残基被丝氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或丙氨酸替换。
8.权利要求5-7中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含在对应于野生型人类Neu2(SEQ ID NO：1)的第332位的位置处半胱氨酸残基的替换。
9.权利要求8所述的唾液酸酶，其中所述在对应于野生型人类Neu2的第332位的位置处的半胱氨酸残基被丙氨酸替换(C332A)。
10.权利要求5-9中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶在对应于野生型人类Neu2(SEQ ID NO：1)的第352位的位置处包含半胱氨酸残基的替换。
11.权利要求10所述的唾液酸酶，其中所述在对应于野生型人类Neu2的第352位的位置处的半胱氨酸残基被亮氨酸替换(C352L)。
12.权利要求9或11所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含所述C332A和C352L替换。
13.权利要求1-12中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含至少一个野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶增加所述唾液酸酶的等电点(pI)和/或降低所述唾液酸酶的疏水性。
14.权利要求13所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶增加所述唾液酸酶的等电点(pI)。
15.权利要求13或14所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含野生型氨基酸残基的替换，其中所述替换相对于没有所述替换的唾液酸酶降低所述唾液酸酶的疏水性。
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