[发明专利]修饰的正痘病毒载体

说明书

本发明公开涉及修饰的正痘病毒载体以及使用其治疗多种癌症的方法。本发明公开提供了显示出多种有益治疗活性的修饰的正痘病毒载体，所述有益治疗活性包括提高的溶瘤活性、感染的扩散、免疫逃避、肿瘤持久性、掺入外源DNA序列的能力和安全性。我们所发现的病毒还对于大规模生产规程是可采用的。

技术领域

本发明涉及免疫疗法领域，例如，用于治疗细胞增殖异常，如癌症的免疫疗法领域。具体地，本发明涉及基因修饰的正痘病毒(orthopoxviruses)以及制备和使用所述正痘病毒的方法。

发明背景

可以刺激免疫系统以识别肿瘤细胞并靶向它们进行破坏。使用溶瘤正痘病毒(oncolytic orthopoxviruses)的免疫疗法是癌症研究中快速发展的领域。需要新的方法来工程设计和/或提高溶瘤病毒的肿瘤-选择性以使效率和安全最大化。当将潜在毒性的治疗剂或基因加入至病毒时，这种选择性是特别重要的。

尽管正痘病毒作为临床溶瘤载体的使用是有希望的癌症治疗范式，但是由于在患者中的毒性，如痘病变(pox lesions)以及免疫抑制副作用，大部分当前的临床候选仅显示出有限的临床成功。仍需要方法来工程设计显示出更稳健的病毒复制、癌细胞杀死和从感染点的扩展的正痘病毒。本发明通过使用修饰的牛痘病毒解决了这种需要并且提供了选择性和安全性限制的解决方案。

发明概述

本发明公开描述了正痘病毒用于癌症治疗的使用。具体地，本发明公开部分基于当基因修饰正痘病毒以包含以下基因中的一种或多种或者全部中的缺失时，意外提高的溶瘤活性，感染的扩展以及安全性结果：C2L、C1L、N1L、N2L、M1L、M2L、K1L、K2L、K3L、K4L、K5L、K6L、K7R、F1L、F2L、F3L、B14R、B15R、B16R、B17L、B18R、B19R、B20R、K ORF A、K ORF B、B ORFE、B ORF F、B ORF G、B21R、B22R、B23R、B24R、B25R、B26R、B27R、B28R和B29R。在这些基因中的一种或多种或者全部中显示出突变的基因修饰的正痘病毒，如牛痘病毒(例如，哥本哈根(Copenhagen)、西储(Western Reserch)、惠氏(Wyeth)、李斯特(Lister)、EM63、ACAM2000、LC16m8、CV-1、修饰的安卡拉痘苗(MVA)、Dairen I、GLV-1h68、IHD-J、L-IVP、LC16m8、LC16mO、Tashkent、Tian Tan和WAU86/88-1病毒)可以显示出一系列有益特征，如改善的溶瘤能力、肿瘤内的复制、感染性、免疫逃避(immune evasion)、肿瘤持久性(tumorpersistence)、掺入外源DNA序列的能力和/或大规模生产的可采性。本发明公开描述了进一步基因修饰以包含B8R基因中的缺失的正痘病毒。在以下公开的多个实施方式中，本发明可以或可以不包括B8R基因的缺失。在多个实施方式中，修饰的正痘病毒表达三种转基因中的至少一种：IL-12-TM、FLT3-L和抗-CLTA4抗体。

在第一个方面，本发明的特征在于包括重组正痘病毒基因组(recombinantorthopoxviruses genome)的核酸，其中所述重组正痘病毒基因组具有至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个基因的缺失，每个所述基因独立地选自C2L、C1L、N1L、N2L、M1L、M2L、K1L、K2L、K3L、K4L、K5L、K6L、K7R、F1L、F2L、F3L、B14R、B15R、B16R、B17L、B18R、B19R、B20R。在一些实施方式中，所述缺失包括C2L、C1L、N1L、N2L、M1L、M2L、K1L、K2L、K3L、K4L、K5L、K6L、K7R、F1L、F2L、F3L、B14R、B15R、B16R、B17L、B18R、B19R、B20R基因中的每一个。在本文所公开的任一个实施方式中，重组正痘病毒基因组还可以包括B8R基因的缺失。