[发明专利]源自干细胞的泪腺组织的制作方法

说明书

一种源自干细胞的泪腺组织的制作方法，其特征在于，从由多能干细胞得到的SEAM细胞群(自我形成的外胚层自主性多区细胞群)中分离出SSEA4和CD104双阳性细胞，将所得到的细胞在含有EGF(表皮生长因子)和ROCK抑制剂的培养基中进行三维培养，由此获得表达泪腺的相关蛋白的细胞群。通过本发明，能够由包括iPS细胞的多能干细胞制造泪腺类器官，因此对于利用细胞医疗进行的泪腺相关疾病的再生治疗和与上述疾病相关的研究极其有用。

技术领域

本发明涉及源自干细胞的泪腺组织的制作方法。更详细而言，涉及由多能干细胞、角膜缘干细胞诱导泪腺组织的方法及其应用。

背景技术

人ES细胞、人iPS细胞等人多能干细胞在再生医疗中的应用在世界范围内受到关注。为了将人多能干细胞应用于再生医疗，需要开发出将这些干细胞以高效率稳定地分化诱导为体细胞的技术，对于从人多能干细胞向任意体细胞的选择性分化诱导方法进行了各种研究。

例如，非专利文献1中公开了向人ES细胞中导入在泪腺上皮细胞中丰富存在的转录因子(PAX6、SIX1、FOXC1)而分化诱导泪腺上皮细胞的方法。

另外，作为针对角膜上皮干细胞缺乏症等严重角膜疾病的新型治疗法，本申请的发明人开发了由iPS细胞制作角膜上皮细胞片的技术，并报道了使用动物模型确认了其有效性等的情况(参考专利文献1、非专利文献2、3)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO2016/114285号

非专利文献

非专利文献1：Hirayama et al.,Npj Aging and Mechanisms of Disease,3(1),2017

非专利文献2：Hayashi et al.,Nature Protocols,2017,12(4),683-696,doi:10.1038/nprot.2017.007

非专利文献3：Hayashi et al.,Nature.2016Mar 17,531,376-80,doi:10.1038/nature17000

发明内容

发明所要解决的问题

但是，即使依照现有技术能够分化诱导出泪腺上皮细胞，但为了将其应用于再生医疗，也需要由该泪腺上皮细胞形成泪腺组织特征性的由导管细胞、腺泡细胞、肌上皮细胞这三种细胞构成的三维立体结构，从而形成能够在神经系统的控制下分泌含有各种功能性成分的泪液的泪腺组织，但这在现阶段尚未得以实现。

本发明涉及能够应用于再生医疗等的源自干细胞的泪腺组织的制作方法及其应用。

用于解决问题的方法

本发明人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现，利用FACS从按照非专利文献2中记载的方法得到的同心圆状的带状结构(自我形成的外胚层自主性多区：a self-formed ectodermal autonomous multi-zone；SEAM)中分离特定的细胞，使用基质胶(Matrigel)并组合各种生长因子进行三维诱导，由此首次能够在体外制作表达泪腺相关蛋白的泪腺样组织。

即，本发明涉及以下的[1]～[7]。

[1]一种源自干细胞的泪腺组织的制作方法，其特征在于，从由多能干细胞得到的SEAM细胞群(自我形成的外胚层自主性多区细胞群)中分离出SSEA4和CD104双阳性细胞，将所得到的细胞在含有EGF(表皮生长因子，Epidermal Growth Factor)和ROCK抑制剂的培养基中进行三维培养，由此获得表达泪腺的相关蛋白的细胞群。

[2]如上述[1]所述的制作方法，其中，分离出的细胞进一步为CD200阴性。