[发明专利]新型CRISPR DNA靶向酶及系统

权利要求书

1.一种工程改造的非天然存在的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)相关联的(Cas)系统，所述系统包含：

V-I型(CLUST.029130)RNA指导物或编码所述V-I型RNA指导物的核酸，其中所述RNA指导物包含直接重复序列和能够与靶核酸杂交的间隔子序列；以及

V-I型(CLUST.029130)CRISPR-Cas效应子蛋白或编码所述效应子蛋白的核酸，其中所述效应子蛋白能够结合所述RNA指导物并靶向与所述间隔子序列互补的靶核酸序列，并且其中所述靶核酸是DNA。

2.如权利要求1所述的系统，其中所述系统包含两种或更多种RNA指导物。

3.如权利要求1或权利要求2所述的系统，其中所述V-I型CRISPR-Cas效应子蛋白在长度上小于约1100个氨基酸，并且包含至少一个RuvC结构域。

4.如权利要求1或权利要求2所述的系统，其中所述V-I型RNA指导物包含在所述V-I型RNA指导物内依顺序排列的直接重复序列、所述间隔子序列和第二直接重复。

5.如权利要求1至4中任一项所述的系统，其中所述V-I型CRISPR-Cas效应子蛋白包含以下中的一种或多种：

包含氨基酸序列X₁SHX₄DX₆X₇(SEQ ID NO:200)的RuvC结构域，其中X₁是S或T，X₄是Q或L，X₆是P或S，并且X₇是F或L，

包含氨基酸序列X₁XDXNX₆X₇XXXX₁₁(SEQ ID NO:201)的RuvC结构域，其中X₁是A、G或S，X是任何氨基酸，X₆是Q或I，X₇是T、S或V，并且X₁₀是T或A；以及

包含氨基酸序列X₁X₂X₃E(SEQ ID NO:210)的RuvC结构域，其中X₁是C、F、I、L、M、P、V、W或Y，X₂是C、F、I、L、M、P、R、V、W或Y，并且X₃是C、F、G、I、L、M、P、V、W或Y。

6.如权利要求1至4中任一项所述的系统，其中所述V-I型CRISPR-Cas效应子蛋白包含与表4中的氨基酸序列至少80％(例如，81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列。

7.如权利要求6所述的系统，其中所述V-I型CRISPR-Cas效应子蛋白包含与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性的氨基酸序列。

8.如权利要求1至7中任一项所述的系统，其中所述V-I型RNA指导物包含直接重复序列，所述直接重复序列包含靠近所述直接重复序列的3’末端的茎环结构，其中所述茎环结构包含

长度为5个核苷酸的第一茎核苷酸链；

长度为5个核苷酸的第二茎核苷酸链，其中所述第一和第二茎核苷酸链可以彼此杂交；以及

排列在所述第一和第二茎核苷酸链之间的环核苷酸链，其中所述环核苷酸链包含6、7或8个核苷酸。