[发明专利]使用闭合端DNA（CEDNA）载体控制转基因的表达

权利要求书

1.一种调控转基因在受试者中的表达的方法，其包含：

a.向受试者施用足量的无衣壳闭合端DNA(ceDNA)载体以表达可测量水平的所述转基因，所述载体包含含有至少一个转基因的核酸盒，所述转基因可操作地连接到介于侧接的反向末端重复序列(ITR)之间的启动子，其中所述转基因编码治疗疾病的所期望蛋白质；并且

b.通过向所述受试者施用至少第二剂量的所述ceDNA载体来滴定所述ceDNA载体，以使得所期望的蛋白质的所述转基因表达在预定水平维持预定的时间或使所期望的蛋白质的所述转基因表达增加到预定水平，所述ceDNA载体包含所述至少一个介于侧接的ITR之间的转基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)之后评估所述受试者以确定所述滴定剂量。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述评估是在步骤(a)之后确定所述受试者的疾病状态或所期望的蛋白质在所述受试者中的表达水平。

4.一种调控转基因在受试者中的表达的方法，其包含：

a.向所述受试者施用足量的无衣壳闭合端DNA(ceDNA)载体以表达可测量水平的所述转基因，所述载体包含含有至少一个转基因的核酸盒，所述转基因可操作地连接到介于侧接的反向末端重复序列(ITR)之间的启动子，其中所述转基因编码所期望的蛋白质；以及

b.向所述受试者施用至少第二剂量的所述ceDNA载体，所述ceDNA载体包含至少一个介于侧接的ITR之间的转基因，以(i)使所期望的蛋白质的表达在预定水平持续预定的时间或(ii)将所期望的蛋白质的表达调节到预定水平。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述ceDNA载体的第二次施用不产生足以妨碍所期望的蛋白质的表达达到预定水平的免疫反应。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述ceDNA载体与药学上可接受的载剂组合施用。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述第二次施用是在所述转基因的表达水平相对于所期望水平降低时进行。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述第二次施用是在第一次施用之后的至少90天进行。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述转基因编码治疗蛋白且所述转基因的期望表达水平是所述治疗蛋白的治疗有效量。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述ceDNA载体存在至少三次施用，并且所述施用都没有对所述ceDNA载体产生妨碍所期望的蛋白质的表达达到所述预定水平的免疫应答。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述施用定期进行。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述第二次施用是为了使所期望的蛋白质的表达水平增加。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第二次施用是为了使所期望的蛋白质的表达在表达的预定水平延长。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所期望的蛋白质是抑制蛋白。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述抑制蛋白是抗体或融合蛋白。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所期望的蛋白质替换缺陷蛋白质或未被表达的蛋白质。

17.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述启动子是诱导型或可抑制型启动子。