[发明专利]产生人抗体的转基因鸡

权利要求书

1.一种转基因鸡的基因组，其中所述转基因鸡的基因组包含修饰的内源性免疫球蛋白重链基因座，所述基因座：

(a)缺少整个连续内源性鸡V-D-J区；和

(b)以可操作的连接包含：

(i)免疫球蛋白重链基因启动子；

(ii)人种系V_H区段，其包含可变结构域的编码序列，所述可变结构域包含FR1、CDR1、FR2、CDR2和FR3序列；

(iii)人D簇；

(iv)单个人J区段；

(v)多个编码恒定区的序列；和在(b)(ii)的人种系V_H区段的上游：

(vi)结构为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3的多个假基因，其各自包含：

与(b)(ii)的功能性人VH区段相同的FR1、FR2和FR3序列；和

在假基因之间不同的CDR1和CDR2序列，

其中：

修饰的免疫球蛋白重链基因座在鸡中经历V(D)J重组；

V(D)J重组后，多个人种系V_H假基因通过基因转换将核苷酸序列施予给人种系V_H区段；和

所述鸡产生包含多样化的免疫球蛋白重链的抗体。

2.根据权利要求1所述的转基因鸡的基因组，其中(b)(vi)的CDR1和CDR2序列编码与(b)(ii)的功能性人V_H区段属于同一家族的不同人V_H区段的CDR1和CDR2。

3.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中(a)的整个连续内源性鸡V-D-J区的长度在10-12kb的范围内。

4.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中(b)(i)的启动子是鸡免疫球蛋白重链基因启动子。

5.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中(b)(ii)的人种系V_H区段和(vi)的CDR1和CDR2序列来自V_H3家族、V_H1家族或V_H4家族。

6.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中在D簇中，半胱氨酸的任何密码子已被突变以编码另一种氨基酸。

7.根据权利要求6所述的转基因鸡的基因组，其中在D簇中，半胱氨酸的任何密码子已被突变以编码酪氨酸或色氨酸。

8.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中D簇中的间插序列来自鸡。

9.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中(b)(v)的多个假基因包含至少10个假基因。

10.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中(b)(v)的假基因与(b)(ii)的人种系VH区段处于相反方向。

11.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中编码(b)(v)的恒定区的多个序列对于所述鸡是内源性的。

12.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中所述修饰的免疫球蛋白重链基因座的转录物包含将编码J的序列的一个拷贝的3'端与(b)(v)的恒定区编码序列的一个拷贝的5'端连接的内含子。

13.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中所述鸡对于修饰的免疫球蛋白重链基因座是纯合的。

14.根据前述权利要求中任一项所述的转基因鸡的基因组，其中所述鸡对于修饰的免疫球蛋白重链基因座是杂合的，并且同源染色体上的免疫球蛋白重链基因座被敲除。