[发明专利]单链RNA的制造方法

权利要求书

1.单链RNA的制造方法，其包括下述工序：使被分类为国际生物化学与分子生物学联盟以酶编号规定的EC6.5.1.3、且具有缺口修复活性的RNA连接酶，与在5’末端具有磷酸基团的第一单链RNA和第二单链RNA以及在5’末端具有羟基的第三单链RNA进行作用，从而将所述第一单链RNA与所述第二单链RNA与所述第三单链RNA连结，所述制造方法中，

a)所述第一单链RNA为从5’末端侧起依次由X1区域、W1区域、Lw接头区域及W2区域形成的单链RNA，

b)所述第二单链RNA为从5’末端侧起依次由Z2区域、Lz接头区域、Z1区域及Y1区域形成的单链RNA，

c)所述第三单链RNA为从5’末端侧起依次由X2区域及Y2区域形成的单链RNA，

d)所述X1区域和所述X2区域包含彼此互补的、由2个以上的相同数目核苷酸形成的核苷酸序列，

e)所述Y1区域和所述Y2区域包含彼此互补的、由2个以上的相同数目核苷酸形成的核苷酸序列，

f)所述Z1区域和所述Z2区域包含彼此互补的、由1个以上的相同数目核苷酸形成的核苷酸序列，

g)所述W1区域及所述W2区域各自独立地包含任意数目的核苷酸序列，

h)所述Lz接头区域及所述Lw接头区域各自独立地为具有由氨基酸衍生的原子团的接头区域，

i)通过所述第一单链RNA与所述第二单链RNA与所述第三单链RNA的连结而生成的单链RNA为从5’末端侧起依次由所述X2区域、所述Y2区域、所述Z2区域、所述Lz接头区域、所述Z1区域、所述Y1区域、所述X1区域、所述W1区域、所述Lw接头区域及所述W2区域形成的连结单链RNA。

2.如权利要求1所述的制造方法，其中，所述Lz接头区域为下述式(I)表示的二价基团，

[化学式1]

式(I)中，Y₁₁及Y₂₁各自独立地表示碳原子数1～20的亚烷基，Y₁₂及Y₂₂各自独立地表示氢原子或可被氨基取代的烷基，或者Y₁₂与Y₂₂以其末端彼此键合而表示碳原子数3～4的亚烷基，

键合于Y₁₁的末端氧原子与所述Z1区域及所述Z2区域中任一者的末端核苷酸的磷酸酯的磷原子键合，

键合于Y₂₁的末端氧原子与所述Z2区域及所述Z1区域中的未与Y₁₁键合的另一区域的末端核苷酸的磷酸酯的磷原子键合。

3.如权利要求2所述的制造方法，其中，所述Lz接头区域为下述式(I)表示的二价基团，所述Lw接头区域为下述式(I’)表示的二价基团，

[化学式2]

式(I)中，Y₁₁及Y₂₁各自独立地表示碳原子数1～20的亚烷基，Y₁₂及Y₂₂各自独立地表示氢原子或可被氨基取代的烷基，或者Y₁₂与Y₂₂以其末端彼此键合而表示碳原子数3～4的亚烷基，

键合于Y₁₁的末端氧原子与所述Z1区域及所述Z2区域中任一区域的末端核苷酸的磷酸酯的磷原子键合，

键合于Y₂₁的末端氧原子与所述Z2区域及所述Z1区域中的未与Y₁₁键合的另一区域的末端核苷酸的磷酸酯的磷原子键合，

[化学式3]

式(I’)中，Y’₁₁及Y’₂₁各自独立地表示碳原子数1～20的亚烷基，Y’₁₂及Y’₂₂各自独立地表示氢原子或可被氨基取代的烷基，或者Y’₁₂与Y’₂₂以其末端彼此键合而表示碳原子数3～4的亚烷基，

键合于Y’₁₁的末端氧原子与所述W1区域及所述W2区域中任一区域的末端核苷酸的磷酸酯的磷原子键合，

键合于Y’₂₁的末端氧原子与所述W2区域及所述W1区域中的未与Y’₁₁键合的另一区域的末端核苷酸的磷酸酯的磷原子键合。