[发明专利]包含三苯甲基的单分散聚乙二醇的纯化方法

说明书

一种从包含特定三苯甲基的单分散聚乙二醇和特定的双三苯甲基化杂质的混合物中纯化特定的包含三苯甲基的单分散聚乙二醇的方法，该方法包含步骤(A)、(B)和(C)：步骤(A)：通过特定方法酯化包含三苯甲基的单分散聚乙二醇的羟基的步骤；步骤(B)：通过特定方法萃取酯化的化合物的步骤；步骤(C)：水解酯化的化合物以获得包含三苯甲基的单分散聚乙二醇的步骤。

技术领域

本发明涉及用于医药用途的单分散聚乙二醇(PEG)的高效率且高纯度的制造的纯化方法。更具体地，本发明涉及用于去除单分散PEG合成特有的PEG链长延长反应中生成的双三苯甲基化杂质的方法。

背景技术

通过对药物进行修饰而提高药物在血液中的循环的PEG已经在药物递送系统(DDS)和医药领域中广泛地使用。近年来，从药物修饰时的功能和安全性的观点，需要这样的PEG具有更高的纯度。

一方面，通过环氧乙烷的开环聚合合成的PEG是具有多种分子量的不均一混合物。另一方面，从诸如低分子量乙二醇的原料逐次合成的单分散PEG是具有单一分子量的单一化合物，并且是以高纯度为特征的新型DDS材料。由于单分散PEG是逐次合成的，与通过开环聚合合成的传统PEG的情况相比，用于延长链长所需要的劳动是繁杂的，并且通常使用的是乙二醇链长数量为48以下的低分子量化合物。

近年来，抗体结合药物(Antibody-Drug Conjugate：ADC)在实践中使用并且引起了高度关注，在抗体结合药物中药物和抗体通过连接物结合，并且能够将药物主动转运至抗原呈递细胞。(非专利文献1和非专利文献2)

当前用作ADC的连接物材料的材料之一是异型单分散PEG。由于异型单分散PEG是在两个末端具有互不相同的官能团的单分散PEG，所以抗体和药物结合于各个末端。然而，当在异型单分散PEG中存在在两个末端具有相同官能团的单分散PEG时，生成了结合了两个抗体的杂质或结合了两个药物的杂质。这些杂质的存在降低了目标ADC的产量，因此，本领域中需要高纯度的异型单分散PEG。

此外，在制造ADC时，由于结合药物的数量通常使用质谱仪或HPLC(高效液相色谱)来确定，当连接物材料中存在具有不同的乙二醇链长的单分散PEG作为杂质时，产生了该确认变得困难的制造上的问题。另外，作为具有不同乙二醇链长的杂质的存在的结果，由于在制造ADC时要加入的抗体和药物的当量不明确，所以产生了下列问题：即必须过量地使用昂贵的抗体和药物以及在药品申请时形成了具有多种分子量的化合物，并且因此使得化合物的鉴定以及各种试验的实施变得必要。因此能够说，对于异型单分散PEG，重要的是高纯度地包含仅一种具有相同乙二醇链长的单分散PEG。

如上文所述，期望的是用作ADC的连接物材料的异型单分散PEG是包含在两个末端具有不同官能团的异型单分散PEG作为主要成分，其是具有均一的乙二醇链长的单分散PEG，特别地具有高纯度。

一般而言，公知的是在单分散PEG的链长延长步骤中，使用具有诸如大体积疏水基团的三苯甲基的羟基保护基团的乙二醇衍生物作为原料。此外，在延长单分散PEG链长的各个步骤，形成了具有不同链长数量或不同官能团的杂质。然而，不同于高分子量PEG，低分子量单分散PEG被官能团极大地影响，并且在许多情况下为液体，使得聚合物特有的简单结晶纯化不能频繁地进行。因此，许多这样的杂质残留在目标物中。另外，在链长延长步骤中，在目标物和杂质之间没有明确的极性差异，因此难以通过任何工业可行的纯化方法对其进行分离。

尽管对于单分散PEG的制造方法有多个报告，但是在专利文献1中，单分散PEG的链长通过以下方法延长。

如上文所述，在链长延长步骤中，作为目标的十二聚体单分散PEG的化合物8包含双三苯甲基化杂质3、6和9。由于这些杂质具有类似于目标物的物理性质，所以难以将其去除，并且纯化方法局限于诸如柱色谱的纯化方法，不适合于放大(scale-up)。另外，专利文献1没有记载用于从化合物8中去除这些双三苯甲基化杂质的纯化方法。