[发明专利]中空纤维用于获得源于血细胞和血小板的细胞外囊泡贫化的血液或血液衍生物的用途

说明书

本发明涉及具有孔隙为20nm以上的中空纤维特别是聚醚砜中空纤维用于使血液和血液衍生物贫化源于血液的细胞外囊泡特别是胞外体和外来体的用途，以及用于获得和分析这样的贫化的样品的方法。

本发明涉及具有孔隙为20nm以上的中空纤维特别是聚醚砜中空纤维用于使血液和血液衍生物贫化源于血液的细胞外囊泡特别是微囊泡和胞外体和外来体(exomers)的用途，以及用于获得和分析这样的贫化的样品的方法。

背景技术

细胞外囊泡是细胞起源的30nm-2μm的膜性实体。这些包括凋亡小体(1μm以上)、肿瘤泌体(oncosomes)(1μm以上)、微囊泡(200nm-1μm)、胞外体(30-120nm)和外来体(约35nm)(Van Der Pol et al.,Zhang et al.)。

中空纤维(HF)是一类半渗透性屏障，其具有特别是在透析领域中的用途(Ishihara et al.)。它们的主要特征是它们的孔隙，即平均孔径和孔分布。在医学领域，它们通常用作用于血液透析、血液滤过和血浆置换的过滤器。

中空纤维使用多种材料生产，这些材料包括纤维素、纤维素酯、聚砜、聚醚砜(PES)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚酰胺、含氮聚合物、玻璃、二氧化硅、乙酸纤维素、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚(氯乙烯)(PVC)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚酯、陶瓷、聚酰亚胺、聚醚酰亚胺、聚乙烯亚胺官能化的聚酰胺酰亚胺(Torlon^TM)、聚(乙烯醇)(PVA)。(Seo-Hyun Pak etal.；Xing Yanga et al.Hailin Zhu et.Al；Amir Dashti et al.；Ze-Lin Qiu et al.；LiFS et al.；Labreche Y et al.；Zhang Y et al.；Higa M et al.,Mock 2007)。

本领域充满了如何可以制备血液和血液衍生物用于分析的实例。

血液衍生物的制备通常遭受血小板和白细胞的活化以及溶血。血小板的活化，例如可以仅仅通过摇动包含血液样品的试管测试来实现(Black et al.)。同样，造血起源的细胞外囊泡的存在是源于实质和基质的细胞外囊泡的分离和分子分析的已知混杂因素，影响分析的信噪比和结果的再现性。

现有技术

在现有技术中结合中空纤维保留囊泡的能力已经描述了中空纤维，因为其孔隙不允许它们通过(WO 2007127848，WO 2001082958)或是因为中空纤维为了结合囊泡已进行了化学改性(WO 2015130956)。

附图说明

图1-通过离心、通过穿过200nm孔隙的HF装置过滤或者通过穿过20nm孔隙的HF装置过滤而获得的血浆的纳米颗粒计数。

图2-在三种转移性黑色素瘤患者离心的血浆中通过等位基因频率BRAF基因拷贝(拷贝/mL)或通过穿过200nm HF装置过滤获得的血浆样品中测量的源于血液的胞外体的数量。

图3-通过穿过200nm孔隙的非HF纤维素过滤器过滤获得的血浆样品中测量的源于血液的胞外体的数量。

图4-通过穿过200nm HF装置过滤或离心获得的血浆样品中存在的微囊泡的小RNA电泳图。

图5-如在离心或穿过200nm聚醚砜HF装置过滤后测量的健康供体血液中掺入的肿瘤胞外体中的BRAF^V600E突变的水平(A)或者BRAF^V600E相对BRAF^WT的比率(B)。

图6-通过穿过200nm HF装置过滤或通过离心获得的血浆样品中测量的CD9-和TM9SF4-阳性胞外体的数量。

图7–在离心或穿过200nm孔隙的聚醚砜HF装置过滤后的健康供体血浆样品的高血脂(Lipemic)指数。