[发明专利]治疗血红蛋白病的系统和方法

权利要求书

1.一种RNP复合物，其包含来自普雷沃菌属(Prevotella)和弗朗西斯菌属(Franciscella)的CRISPR 1(Cpf1)RNA指导的核酸酶或其变体和gRNA，其中所述gRNA能够结合细胞中的HBG基因启动子中的靶位点。

2.如权利要求1所述的RNP复合物，其中所述gRNA经修饰或未经修饰。

3.一种改变细胞中HBG基因启动子的方法，所述方法包括使所述细胞与如权利要求1所述的RNP复合物接触。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述改变包含所述HBG基因启动子的CCAAT盒靶区域内的indel。

5.如权利要求1所述的RNP复合物，其中所述靶位点包含位于Chr 11(NC_000011.10)5,249,904-5,249,927(表17，区域6)和Chr 11(NC_000011.10)5,254,879-5,254,909(表17，区域16)之间的核苷酸；或其组合。

6.一种分离的细胞，所述分离细胞包含HBG基因启动子中的改变，所述改变通过将RNP复合物递送至如权利要求1所述的细胞而产生。

7.一种增加人细胞中胎儿血红蛋白(HbF)水平的离体方法，所述方法是通过使用包含gRNA和Cpf1 RNA指导的核酸酶或其变体的RNP复合物进行基因组编辑，以实现HBG基因启动子中的改变，从而增加HbF的表达。

8.一种CD34+或造血干细胞群体，其中所述群体中的一个或多个细胞包含HBG基因启动子中的改变，所述改变是通过将RNP复合物递送至所述CD34+或造血干细胞群体产生的，所述RNP复合物包含gRNA和Cpf1 RNA指导的核酸酶或其变体。

9.一种减轻有需要的受试者中镰状细胞病的一种或多种症状的方法，所述方法包括：

a)从所述受试者中分离CD34+或造血干细胞群体；

b)通过以下来修饰离体分离的细胞群体：将包含gRNA和Cpf1 RNA指导的核酸酶或其变体的RNP复合物递送至分离的细胞群体，从而实现所述群体中的一个或多个细胞中HBG基因启动子中的改变；和

c)对所述受试者施用经修饰的细胞群体，

从而减轻所述受试者的镰状细胞病的一种或多种症状。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述改变包含所述HBG基因启动子的CCAAT盒靶区域内的indel。

11.如权利要求9所述的方法，其中所述RNP复合物使用电穿孔递送。

12.如权利要求9所述的经修饰的细胞群体，其中所述细胞群体中至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的细胞包含有效indel。

13.一种gRNA，其包含5’末端和3’末端，并且在所述5’末端包含DNA延伸并且在所述3’末端包含2’-O-甲基-3’-硫代磷酸酯修饰，其中所述gRNA包括能够与靶位点杂交的RNA区段和能够与Cpf1 RNA指导的核酸酶缔合的RNA区段。

14.如权利要求13所述的gRNA，其中所述DNA延伸包含SEQ ID NO:1235-1250所示的序列。

15.一种RNP复合物，其包含Cpf1 RNA指导的核酸酶和如权利要求14所述的gRNA。