[发明专利]心力衰竭检测方法、心力衰竭检测用器具、夹心免疫检测法以及抗体的组合

说明书

[所要解决的问题]简单且高精度地对心力衰竭进行检测等。[解决问题的技术方案]提供一种使用了从活体采集的样本的心力衰竭检测方法，其通过使用表位为NT‑proANP的氨基酸序列31～67位中任一部位的捕获用第一抗体和表位为NT‑proANP的氨基酸序列31～67位中任一部位的标记用第二抗体对上述样本中含有的NT‑proANP或其片段实施夹心免疫检测，来检测心力衰竭。捕获用抗体和标记用抗体这两种抗体的表位都在NT‑proANP的氨基酸序列31～67位中，因此，即使在NT‑proANP在血液循环中被进一步切断三部分的情况下，也能够检测出与切断分解前的NT‑proANP相同物质量的片段。因此，能够简单且高精度地测定活体样本中的NT‑proANP并检测出心力衰竭。

技术领域

本发明涉及使用了表位为NT-proANP的氨基酸序列31～67位中任一部位的捕获用第一抗体和表位为NT-proANP的氨基酸序列31～67位中任一部位的标记用第二抗体的心力衰竭检测方法、心力衰竭检测用器具、夹心免疫检测法、两抗体的组合等。

背景技术

心力衰竭(heart failure)是心脏的血液输出不足、无法保证全身所需的循环量的病症。多数影响心脏的疾病、例如先天性心脏病、心脏瓣膜病(例如二尖瓣关闭不全、三尖瓣关闭不全、主动脉瓣关闭不全、肺动脉瓣关闭不全等)、心肌疾病(例如扩张性心肌病、肥厚性心肌病、心肌炎等)、盘尾丝虫病、血管疾病(例如血栓、塞栓、动脉硬化等)、高血压症等都是引发心力衰竭的原因。

心力衰竭多数情况下在初期病状中几乎不会表现出明显的症状，之后，经过数日、有时为数年，呼吸急促、疲劳等症状会逐渐明显。心力衰竭症状有时会稳定较长时间，但在不知不觉间慢慢发展的情况也很多。总体而言，心力衰竭是一种如不进行充分治疗病情就会逐渐加重的进行性疾病，预后也多数不佳，因此早期发现至关重要。

ANP(Atrial natriuretic peptide；心房利钠肽)是一种由28个氨基酸组成的具有生理活性的肽。ANP在心房体液量增加、内压上升等的刺激下由心房肌细胞等分泌至血液中。作为激素发挥作用，以肾脏、血管等为靶器官，具有强效的排钠利尿作用、以及舒张血管和降血压作用。但是，其在血液中的半衰期约为100秒，难以测定其血中浓度。

ANP在心房肌细胞等中被生物合成为其前体proANP(Proatrial natriureticpeptide：前心房利钠肽)。ANP的前体proANP由126个氨基酸组成，由氨基酸序列1～98位的NT-proANP(N-terminal proANP)和氨基酸序列99～126位的ANP组成。在由心房肌细胞等分泌到血液中时，被切断为NT-proANP和ANP。

已知在人、犬等患有充血性心力衰竭等时，血液中的ANP会增加；因此，ANP作为心力衰竭等的标志物是有用的。但是，如上所述，ANP在血液中的稳定性较低，其半衰期较短，因此，难以简易且高精度地测定。故而，人们尝试使用血液中的NT-proANP来替代ANP作为心力衰竭等的标志物，并提出了各种建议。

例如，专利文献1中记载了使用对N肽的氨基酸序列43～66位进行识别的第一抗体或第二抗体的夹心免疫检测法等；专利文献2中记载了使用对NT-proANP的氨基酸序列53～72位进行识别的第一抗体和对该序列73～90位进行识别的第二抗体的夹心免疫分析等；专利文献3中记载了使用对犬NT-proANP的氨基酸序列31～40位进行识别的抗体和对该序列74～82位进行识别的抗体的免疫学测定方法以及犬的心脏疾病检测方法等。

此外，非专利文献1中还记载了人的NT-proANP在血液循环中会进一步被切断分解为氨基酸序列1～30位、该序列31～67位、该序列79～98位这三部分；以及人的NT-proANP的氨基酸序列31～67位的片段作为充血性心力衰竭的标志物，敏感度最高。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本公开专利公报特开平8-226919号公报