[发明专利]雷帕霉素抗性细胞

权利要求书

1.一种系统，所述系统包括：

脱氧核糖核酸(DNA)核酸内切酶或编码所述DNA核酸内切酶的核酸；

向导RNA(gRNA)或编码所述gRNA的核酸，所述向导RNA包含与细胞中的靶基因组基因座内的靶序列互补的间隔区序列；以及

包含供体盒的供体模板，所述供体盒包含编码裸露的FKBP-雷帕霉素结合(FRB)结构域多肽的核酸序列，

其中，所述DNA核酸内切酶、gRNA和供体模板被配置以使得通过所述DNA核酸内切酶与所述gRNA的关联而形成的复合物能够促进所述供体盒靶向整合入细胞中的靶基因组基因座，以产生能够表达所述裸露的FRB结构域多肽的经遗传修饰的细胞。

2.如权利要求1所述的系统，其中，所述DNA核酸内切酶是Cas9核酸内切酶。

3.如权利要求1-2中任一项所述的系统，其中，

将所述编码DNA核酸内切酶的核酸进行密码子优化以用于在所述经遗传修饰的细胞中表达；

将所述编码gRNA的核酸进行密码子优化以用于在所述经遗传修饰的细胞中表达；和/或

将所述供体盒中的一个或多个编码序列进行密码子优化以用于在所述经遗传修饰的细胞中表达。

4.如权利要求1-3中任一项所述的系统，其中，所述供体模板被配置以使得所述供体盒能够通过同源介导修复(HDR)整合入所述靶基因组基因座中。

5.如权利要求1-3中任一项所述的系统，其中，所述供体模板被配置以使得所述供体盒能够通过非同源末端连接(NHEJ)整合入所述靶基因组基因座中。

6.如权利要求1-5中任一项所述的系统，其中，将所述DNA核酸内切酶或编码所述DNA核酸内切酶的核酸配制在脂质体或脂质纳米颗粒中。

7.如权利要求6所述的系统，其中，所述脂质体或脂质纳米颗粒进一步包含所述gRNA或编码所述gRNA的核酸。

8.如权利要求1-7中任一项所述的系统，所述系统包含与核糖核蛋白(RNP)复合物中的gRNA相关联的DNA核酸内切酶。

9.如权利要求1-8中任一项所述的系统，其中，所述裸露的FRB多肽包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的氨基酸序列。

10.如权利要求1-9中任一项所述的系统，其中，所述供体盒进一步包含编码二聚化可激活化学诱导的信号传导复合物(CISC)的多肽组分的一个或多个核酸序列，其中，所述CISC的多肽组分包括：

i)第一CISC组分，所述第一CISC组分包括第一细胞外结合结构域或其功能衍生物、铰链结构域、跨膜结构域、以及信号传导结构域或其功能衍生物；以及

ii)第二CISC组分，所述第二CISC组分包括第二细胞外结合结构域或其功能衍生物、铰链结构域、跨膜结构域、以及信号传导结构域或其功能衍生物；

其中，所述第一CISC组分和所述第二CISC组分被配置以使得当在细胞中表达时，它们能够在雷帕霉素或雷帕霉素类似物的存在下二聚化，以产生具有信号传导能力的CISC。

11.如权利要求10所述的系统，其中，所述第一细胞外结合结构域或第二细胞外结合结构域或其功能衍生物包括FK506结合蛋白(FKBP)结构域或其功能衍生物，和/或另一所述的细胞外结合结构域或其功能衍生物包括FRB结构域或其功能衍生物。

12.如权利要求10-11中任一项所述的系统，其中，所述第一CISC组分的跨膜结构域包括IL-2受体跨膜结构域，和/或所述第二CISC组分的跨膜结构域包括IL-2受体跨膜结构域。