[发明专利]用于转染抵抗细胞类型的组合物

说明书

提供了用于将核酸治疗剂递送至细胞的试剂组合物。试剂包含可电离的脂质、结构脂质和稳定剂，所述稳定剂提高核酸的转染效率并使转染的细胞存活。5转染试剂在质粒和mRNA递送以及在神经元和祖细胞样细胞中是有效的。它可以用于离体细胞治疗。

发明背景

发明领域

本发明的领域是将活性核酸转移到细胞中。

相关技术

多核苷酸或寡核苷酸形式的核酸可以通过干扰特定基因靶标的表达，或者通过恢复或增强特定基因靶标的表达，或者通过编辑基因而用于将治疗集中在所述特定基因靶标上。

因为核酸相对较大，是带负电的亲水性化合物，其不能被动地扩散穿过细胞膜并且也易受核酸酶的攻击，所以将核酸递送到细胞或组织中面临着挑战。(Akhtar,Basu SFau–Wickstrom等人,1991)。

将这些核酸递送穿过细胞膜的现有方法包括将病毒如腺相关病毒作为基因恢复的载体，但这些可以在治疗的个体中引起免疫应答(Mingozzi和High 2013)。可电离的脂质和聚合物也已经用于实验中，但每一种都具有转染效率、稳定性和毒性的问题(Lv,Zhang等人,2006)。为了提高核酸的治疗活性，本领域的重大努力集中于包含可电离的脂质的脂质纳米颗粒(LNP)(所述可电离的脂质包括可电离的阳离子脂质(也称为“可电离的脂质”或“阳离子脂质”)和聚乙二醇化脂质)，用于将核酸有效地封装和递送到细胞中(Tam,Chen等人,2013,Kauffman,Webber等人,2015)。

已经工程化脂质颗粒以获得不同的药代动力学、组织中不同的生物分布、生物降解性或改变的毒性，从而有利于核酸的治疗活性。

iPSC或iPSC样细胞的产生涉及将关键的重编程因子引入供体或患者的体细胞中。一旦成功地建立稳定的iPSC克隆，它们就有可能分化成大多数细胞类型，用于研究或临床应用。作为一种通用的、生理学相关的体外系统，iPSC创新的出现为疾病建模、药物发现和基于细胞的治疗领域提供了前所未有的可能性。iPSC技术的优势在神经科学领域是特别相关的，其中使用基本组织的实验模型是不可行的，并且小动物模型不能充分反映复杂的人神经解剖结构。

iPSC衍生的神经元与原代神经元显示出许多形态、生化和功能的相似性。然而，包括但不限于神经元细胞的终末分化细胞通常由于其敏感性和不能增殖而难以转染，同时保持其活力。尽管事实是已经发现转染和重编程的细胞是临床相关的，并且在神经变性病症、CNS病症和干细胞移植中具有应用，但目前的方法，如电穿孔、磷酸钙共沉淀、脂质转染和核转染通常导致高比例的细胞死亡率。为此，研究人员和对基因治疗感兴趣的人们发现将核酸递送到细胞中的合适替代选择。

发明概述

根据本发明，提供了转染试剂组合物，其包含Mol％的可电离的脂质或其药学上可接受的盐；15至25Mol％的结构脂质；35至41Mol％的固醇；和0.5至约10Mol％的稳定剂。在一些实施方案中，可电离的脂质是氨基脂质或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，稳定剂包含一种以上的表面活性剂。在一些实施方案中，稳定剂是聚山梨醇酯，如聚山梨醇酯(80)或聚山梨醇酯的混合物。在一些实施方案中，稳定剂是麦芽糖苷。在一些实施方案中，稳定剂是聚山梨醇酯和麦芽糖苷的混合物。在优选的实施方案中，稳定剂是聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20和十三烷基-D-麦芽糖苷的混合物。在一个实施方案中，三种组分的比例是相等的(1:1:1)。在实施方案中，可电离的脂质占所述组合物的约40Mol％。在实施方案中，稳定剂为所述组合物的约0.5至5Mol％。在一些实施方案中，固醇是胆固醇。