[发明专利]生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法

权利要求书

1.一种制备组合物的方法，所述组合物包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：

(a)提供第一干燥的组合物和第二干燥的组合物，所述第一干燥的组合物包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二干燥的组合物包含载体蛋白；

(b)分别在有机溶剂中重构所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物并混合，以提供第一均质溶液和第二均质溶液，所述第一均质溶液包含一种或多种活化的多糖，所述第二均质溶液包含所述载体蛋白；

(c)通过Tee混合将所述第一均质溶液与所述第二均质溶液组合，以生产混合物；和

(d)向所述混合物中添加还原剂，以生产缀合物溶液，所述缀合物溶液包含与所述肺炎链球菌血清型的一种或多种多糖缀合的载体蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中通过选自冻干和辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述升华干燥方法包括以饼或冻干球小珠形式冷冻所述第一水溶液和所述第二水溶液。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述升华干燥是在选自以下的容器中进行批量干燥：金属托盘、塑料托盘、塑料袋和I型管瓶。

5.根据权利要求1所述的方法，其中通过包括冻干或辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物，其包括提供第一水溶液和第二水溶液，所述第一水溶液包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二水溶液包含载体蛋白和缓冲剂，其中所述第一水溶液和所述第二水溶液包含约0.5％(w/v)或更多的蔗糖，并且将所述第一水溶液和所述第二水溶液经过升华干燥方法，以生产所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的组氨酸、琥珀酸盐、MES、MOPS、HEPES或乙酸盐缓冲剂。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一干燥的组合物和所述第二干燥的组合物具有小于6％的水分含量。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述重构包括八分钟或更短时间和所述混合包括120分钟或更短时间。

11.根据权利要求1所述的方法，其中每种缀合物溶液包含以重量对重量计以约0.6至约1.3的多糖与载体蛋白的比率缀合至所述载体蛋白的多糖。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液包含小于所述溶液中总多糖的约15％的游离多糖量。