[发明专利]具有经调节的聚糖谱的抗体

说明书

本发明涉及重组表达的迪诺舒单抗分子和调节迪诺舒单抗分子的聚糖谱的方法。

相关申请

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2018年5月1日提交的美国临时申请号62/665,045的权益，将其通过引用以其全部内容并入本文。

技术领域

本发明涉及重组表达的抗体和调节此类抗体的聚糖谱的方法。

背景技术

糖蛋白的聚糖部分的结构和组成可影响治疗性蛋白质的安全性和功效，包括其免疫原性、溶解度和半衰期。哺乳动物细胞培养物中产生的蛋白质可含有不同水平的高甘露糖糖型，例如甘露糖5(Man-5)、甘露糖6(Man-6)、甘露糖7(Man-7)、甘露糖8(Man-8)和甘露糖9(Man-9)。具有高甘露糖含量的抗体已经引起人们的兴趣，因为具有Man-5聚糖和Man-7、8或9聚糖的抗体显示出治疗活性和清除率方面的差异。例如，用几夫碱(kifunensine)处理产生的高甘露糖抗体显示出更高的ADCC活性和对FCγRIIIA的更大亲和力(Zhou等人，(2008),Biotechnol Bioeng[生物技术与生物工程]99(3):652-665)。类似地，Yu等人，据报道，Man-5和Man-8/9糖型似乎具有增加的ADCC活性，降低的CDC活性，增加的对FcγRIIIA的结合亲和力，以及降低的对FcγRIIA和IIB的结合亲和力(Yu等人，MAbs.[单克隆抗体]2012年7月1日；4(4):475-487.doi:10.4161/mabs.20737)。因此，具有增加的高甘露糖聚糖(例如Man-5)的抗体组合物可以提供某些治疗益处。

另一方面，还报道了Man-5和Man-6糖型也比复合岩藻糖基化糖型显示出更快的清除率(Yu等人，同上)。因此，高水平的Man-5聚糖可能导致抗体的半衰期降低和快速清除。因此，需要控制和调节抗体的高甘露糖含量，以实现PK特性和治疗活性(例如ADCC)之间的所需要的平衡。

发明内容

如本文所披露和示例的，已经开发了用于调节迪诺舒单抗(denosumab)上的高甘露糖聚糖水平的方法。具体地，通过在生产期期间减少培养基中葡萄糖的量和增加培养基中半乳糖的量，增加高甘露糖聚糖的水平。本文还披露和示例了包含各种聚糖谱的重组产生的迪诺舒单抗。

基于本文提供的披露内容，本领域技术人员将认知到、或仅使用常规实验就能够确定本文所述发明的特定实施例的许多等效实施例。此类等效实施例意在由以下实施例(E)涵盖。

E1.一种提高迪诺舒单抗分子上存在的高甘露糖水平的方法，其中所述迪诺舒单抗分子由哺乳动物宿主细胞重组表达，该方法包括：

(a)在生长期期间在第一培养基中孵育所述哺乳动物宿主细胞直至细胞密度为至少1x 10⁶个活细胞/mL，其中所述第一培养基包含从约1g/L至约20g/L的葡萄糖；以及随后

(b)在生产期期间在第二培养基中孵育来自步骤(a)的宿主细胞以表达所述迪诺舒单抗分子，其中所述第二培养基包含从约0g/L至约10g/L的葡萄糖和从约5g/L至约20g/L的半乳糖；

其中从约2％至约14％的迪诺舒单抗分子在N-298位点包含高甘露糖聚糖。

E2.一种提高迪诺舒单抗分子上存在的高甘露糖水平的方法，其中所述迪诺舒单抗分子由哺乳动物宿主细胞重组表达，该方法包括：

(a)在生长期期间在第一培养基中孵育所述哺乳动物宿主细胞直至细胞密度为至少1x 10⁶个活细胞/mL，其中所述第一培养基包含从约1g/L至约20g/L的葡萄糖；以及随后

(b)在生产期期间在第二培养基中孵育来自步骤(a)的宿主细胞以表达所述迪诺舒单抗分子，其中所述第二培养基包含从约0g/L至约10g/L的葡萄糖和从约5g/L至约20g/L的半乳糖；