[发明专利]植物基因组编辑

权利要求书

1.一种编辑植物基因组的方法，其包括：

a)向成熟植物胚胎外植体递送包含编码位点特异性核酸酶的序列的重组DNA构建体，其中所述序列可操作地连接至植物可表达启动子；以及

b)从所述成熟植物胚胎外植体再生植物，其中在所述再生植物的至少一个细胞的所述基因组中，所述再生植物在所述位点特异性核酸酶的靶位点处或附近包含编辑或定点整合。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述重组DNA构建体经由细菌介导的转化递送至所述成熟植物胚胎外植体。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述重组DNA构建体经由农杆菌介导的转化递送至所述成熟植物胚胎外植体。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中包含所述重组DNA构建体的T-DNA转化载体被递送至所述成熟植物胚胎外植体。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述重组DNA构建体经由粒子轰击递送至所述成熟植物胚胎外植体。

6.如权利要求5所述的方法，其中包覆或施加有所述重组DNA构建体的粒子经由粒子轰击递送至所述成熟植物胚胎外植体。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述粒子为钨、钯或金粒子。

8.如权利要求6或7所述的方法，其中所述粒子的大小在约0.5μm与约1.5μm之间。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述粒子的大小为约0.6μm、约0.7μm或约1.3μm。

10.如权利要求6所述的方法，其中多个包覆或施加有所述重组DNA构分子的粒子经由粒子轰击递送至所述成熟植物胚胎外植体。

11.如权利要求10所述的方法，其中递送至所述外植体的粒子的量在约50μg与约5000μg之间、或在约50μg与约5000μg之间、或在约50μg与约2000μg之间、或在约50μg与约1000μg之间、或在约50μg与约500μg之间、或在约100μg与约500μg之间。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其还包括：

c)鉴定出在所述位点特异性核酸酶的靶位点处或附近具有至少一个包含所述编辑或定点整合的细胞的再生植物。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述鉴定步骤包括基于表型或性状鉴定出具有所述编辑或定点整合的再生植物。

14.如权利要求12所述的方法，其中所述鉴定步骤包括基于分子测定鉴定出具有所述编辑或定点整合的再生植物。

15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述位点特异性核酸酶为核糖核蛋白。

16.如权利要求6至11中任一项所述的方法，其中所述粒子进一步包覆或施加有指导RNA。

17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述位点特异性核酸酶为Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9、Csn1、Csx12、Cas10、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4、Cpf1、CasX、CasY、CasZ或Argonaute蛋白、或其同源物或修饰形式。