[发明专利]成像测定法

权利要求书

1.一种确定液体样品中目标分析物的存在的方法，其包括以下步骤：

(i)使样品与第一邻位探针接触并孵育，所述第一邻位探针包含对目标分析物具有特异性的分析物结合域，其中所述第一邻位探针通过聚合物栓链分子或生物聚合物栓链分子被栓系于固体支持物，从而将所述目标分析物栓系于所述支持物；

(ii)由对被拴系的目标分析物具有特异性的单独分子生成信号；和

(iii)通过观察所述信号在所述固体支持物上的运动来检测被栓系的目标分析物。

2.根据权利要求1所述的确定液体样品中目标分析物的存在的方法，其中所述信号是荧光。

3.根据权利要求2所述的确定液体样品中目标分析物的存在的方法，其中使用全内反射荧光显微法来照射样品和检测所述目标分析物。

4.根据权利要求1所述的确定液体样品中目标分析物的存在的方法，其中所述信号是光散射。

5.根据任一项前述权利要求所述的确定液体样品中目标分析物的存在的方法，其包括以下步骤：

(i)使样品与第一邻位探针接触并孵育，所述第一邻位探针包含对所述目标分析物具有特异性的分析物结合域，其中所述第一邻位探针通过聚合物栓链分子或生物聚合物栓链分子被栓系于固体支持物；

(ii)使样品与第二邻位探针接触并孵育，所述第二邻位探针包含对所述目标分析物具有特异性的分析物结合域，其中

a.所述第二邻位探针包含荧光团；或

b.所述第二邻位探针在接触样品之前与报告酶缀合；或

c.所述第二邻位探针在接触样品的同时或之后与报告酶缀合；或

d.所述第二邻位探针包含用于荧光原位杂交(FISH)的寡核苷酸序列；或

e.所述第二邻位探针包含纳米颗粒，所述纳米颗粒生成待鉴定的可测量信号；

(iii)a.如果所述第二邻位探针与报告酶缀合，则向样品中添加所述报告酶的荧光底物以生成荧光反应产物；或

b.如果所述第二邻位探针包含用于荧光原位杂交(FISH)的寡核苷酸序列，则使所述第二邻位探针与FISH探针杂交，所述FISH探针包含荧光团和与所述第二邻位探针的寡核苷酸序列互补的寡核苷酸序列；

(iv)照射样品以使荧光团或荧光反应产物发荧光或使纳米颗粒散射光；并且

(v)通过观察来自荧光团或荧光反应产物或纳米颗粒的荧光或散射信号的运动来检测所述目标分析物。

6.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述第一邻位探针包括以下或由以下组成：抗体、凝集素、可溶性细胞表面受体、来自噬菌体展示或核糖体展示的组合衍生的蛋白质、碳水化合物、适体、affimer、亲合体、affilin、affitin、α体、anticalin、avimer、DARPin、寡核苷酸、多核苷酸、单功能抗体，或它们的组合。

7.根据任一项前述权利要求所述的方法，其中所述第二邻位探针包括抗体、凝集素、可溶性细胞表面受体、来自噬菌体展示或核糖体展示的组合衍生的蛋白质、碳水化合物、适体、affimer、亲合体、affilin、affitin、α体、anticalin、avimer、DARPin、寡核苷酸、多核苷酸、单功能抗体或酶，或者由它们组成。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第二邻位探针包含荧光团或纳米颗粒。

9.根据权利要求7任一项所述的方法，其中所述第二邻位探针在接触样品之前与报告酶缀合。

10.根据权利要求7任一项所述的方法，其中所述第二邻位探针在接触样品的同时或之后与报告酶缀合。

11.根据权利要求9或权利要求10所述的方法，其中所述报告酶是碱性磷酸酶(AP)、辣根过氧化物酶(HRP)或β半乳糖苷酶。