[发明专利]用于癌症免疫疗法的表达免疫检查点阻断物的溶瘤痘苗病毒

权利要求书

1.一种工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其包含将异源核苷酸序列插入胸苷激酶(TK)基因的编码序列中，其中所述异源核苷酸序列包含表达盒，所述表达盒含有编码抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)抗体重链(HC)和抗CTLA-4抗体轻链(LC)的开放阅读框，其中所述HC和LC由在5'至3'方向上编码蛋白酶切割位点和2A肽(Pep2A)序列的核苷酸序列分隔开。

2.根据权利要求1所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述蛋白酶切割位点是弗林蛋白酶切割位点。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述表达盒还包含能够引导所述开放阅读框的表达的启动子。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述异源核酸序列还包含另外的表达盒，所述另外的表达盒包含编码与启动子可操作连接的可选标记的开放阅读框，所述启动子能够引导所述可选标记的表达。

5.根据权利要求4所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述可选标记是黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(gpt)基因、生物发光蛋白、荧光蛋白、化学发光蛋白或其任何组合。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述病毒不产生全长胸苷激酶(TK)基因产物。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述开放阅读框包含SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述开放阅读框编码包含重链免疫球蛋白可变结构域(V_H)和轻链免疫球蛋白可变结构域(V_L)的抗CTLA-4抗体或其抗原结合片段，其中：

(a)所述V_H包含GYTFTDY(SEQ ID NO:27)的V_H-CDR1序列、PYNG(SEQ ID NO:28)的V_H-CDR2序列、和YGSWFA(SEQ ID NO:29)的V_H-CDR3序列，并且

(b)所述V_L包含SQSIVHSNGNTY(SEQ ID NO:30)的V_L-CDR1序列、KVS(SEQ ID NO:31)的V_L-CDR2序列、和GSHVPY(SEQ ID NO:32)的V_L-CDR3序列；并且

其中所述开放阅读框与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列至少95％相同。

9.根据权利要求1-6或权利要求8中任一项所述的工程化的E3LΔ83N-TK^--抗CTLA-4痘苗病毒，其中所述开放阅读框编码(a)抗人CTLA-4抗体(抗huCTLA-4)的重链CDR区和抗huCTLA-4的轻链CDR区，或(b)编码抗人CTLA-4抗体(抗huCTLA-4)的重链可变区和抗huCTLA-4的轻链可变区，其中所述抗huCTLA-4任选地是伊匹单抗。