[发明专利]CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)

权利要求书

1.CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)用于在宿主细胞中表达特异于靶基因组中的靶序列的功能性引导RNA或其部分的离体用途，其中所述CRISPR瞬时表达构建体是线性的并且包含：

-引导RNA表达盒，和

-另外的多核苷酸元件，并且

其中所述引导RNA表达盒能够表达特异于靶基因组中的靶序列的功能性引导RNA或其部分，并且其中所述另外的多核苷酸元件与所述靶基因组中的所述靶序列具有序列同一性。

2.根据权利要求1所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中特异于靶基因组中的靶序列的所述功能性引导RNA或其部分是从所述CTEC专有表达的。

3.根据权利要求1或2所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述CTEC由能够彼此重组以产生以下物质的两个或更多个多核苷酸组成：

-引导RNA表达盒，和

-另外的多核苷酸元件，

其中所述引导RNA表达盒能够表达特异于靶基因组中的靶序列的功能性引导RNA或其部分，其中所述另外的多核苷酸元件与所述靶基因组中的所述靶序列具有序列同一性。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中在所述CTEC中，所述引导RNA表达盒和所述另外的多核苷酸元件通过包含与所述引导RNA的所述引导序列对应的靶序列的多核苷酸连接，从而允许从所述另外的多核苷酸元件体内切割所述引导RNA表达盒。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述引导RNA表达盒能够表达功能性引导RNA。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述引导RNA表达盒包含真核启动子。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述功能性引导RNA或其部分由所述引导RNA表达盒上的多核苷酸编码，并且所述多核苷酸可操作地连接至RNA聚合酶II启动子、RNA聚合酶III启动子以及自加工核酶或单亚基DNA依赖性RNA聚合酶启动子，所述单亚基DNA依赖性RNA聚合酶启动子优选地为病毒单亚基DNA依赖性RNA聚合酶启动子，更优选地T3 RNA聚合酶启动子、SP6 RNA聚合酶启动子、K11 RNA聚合酶启动子或T7 RNA聚合酶启动子。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述引导RNA表达盒位于所述另外的多核苷酸元件的3'末端。

9.根据权利要求1至7中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述引导RNA表达盒位于所述另外的多核苷酸元件的5'末端。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途，其中所述CTEC包含能够与载体重组，优选地与质粒重组，以体内产生整合到所述载体中的所述CTEC的两个或更多个多核苷酸序列。

11.包含如在权利要求1至10中任一项中所定义的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)或包含如在权利要求1至10中任一项中所定义的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的文库的组合物用于在宿主细胞中表达特异于靶基因组中的一个或多个靶序列的功能性引导RNA或其部分的离体用途。

12.根据权利要求1至10中任一项所述的CRISPR瞬时表达构建体(CTEC)的离体用途或根据权利要求11所述的组合物的离体用途，所述离体用途还包括使用功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶或能够表达功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶的表达构建体，并且其中所述功能性多核苷酸引导的基因组编辑酶优选地为Cas9或Cpf1。