[发明专利]组织取样

说明书

本发明涉及从固体组织样品中取样新鲜全细胞的方法，例如用于诊断方法。该方法包括：将细胞从固体组织样品释放到溶液中，将至少一部分溶液从固体组织样品中分离出来，以及保留从固体组织样品分离的溶液。由于细胞从周围组织样品释放到溶液中的温和性质，核心组织样品结构得以保持并且仍然适合病理医生进行常规组织分析(例如，在显微镜下检查组织)。释放的细胞可用于多种应用，例如核酸测序。

本发明涉及从固体组织样品中取样新鲜全细胞的方法，例如用于诊断方法。

例如，对于多种实验室过程，癌症的诊断需要肿瘤组织或细胞。肿瘤的基因检测正日益成为癌症诊断和治疗的重要组成部分。期望进行肿瘤DNA的测序以鉴定特异性突变，从而能够进行特异性或确定性更佳的诊断。在某些情况下，对特定突变的了解还允许针对患者肿瘤的遗传组成量身定制更具针对性的治疗方法。还可对除肿瘤以外的组织样品进行基因检测，例如DNA测序，例如，以帮助诊断其他遗传疾病。

当前获得用于测序的肿瘤DNA的方法包括从患者的手术切除物中获取活检或组织，然后机械地和酶促地破坏样品组织以提取DNA。这种技术的一个问题是DNA的产量相对较低(在某些情况下大约提取组织中存在的DNA的5％左右)。另一个问题是该过程破坏了所有组织，这意味着这些物质无法通过常规手段(例如组织病理学检查)进行后续分析，这些分析依赖于完整的组织结构。病理学家喜欢尽可能多地查看活检，以确保其诊断正确性且确定性。如果组织被破坏用于DNA提取，则无法实现这一目的。另一方面，使用常规病理技术处理和分析样品会损坏样品中的DNA，这意味着此类样品通常不适合提供用于全基因组测序的DNA。通常，组织被放置于患者床旁的福尔马林中。结果，整个组织最终都带有受损的DNA。应当指出，目前对嵌入蜡块中的福尔马林损伤的样品进行了基因检测。但是，这些是针对这种情况的单基因测试或成组检测，而不是对整个基因组进行测序，对整个基因组的测序在存在福尔马林损伤的情况下是无法完成的。总之，根据现有的实践和方法，如果既要进行常规分析又要进行DNA测序，则每个过程都需要单独的组织样品。

但是，临床医生通常不愿采集多个活检样品，以免使患者面临额外的风险。活检采样还会给患者带来严重的焦虑和不适，这意味着希望将活检采样保持在最低水平。此外，可能难以获得两个活检样品中都具有很高的肿瘤比例。第二个样品可能不足以进行诊断或DNA提取。活检样品的常规分析将优先于DNA测序，因此，在许多情况下，患者无法进行DNA测序。对于极少数癌症，在活检时可能没有疑似诊断。这些患者还错过了对癌症进行基因组测试的机会。

现有方法的另一个问题是用于DNA提取的组织样品必须冷冻，以阻止组织降解并保存DNA直到可以提取。逐渐冷冻是有问题的，因为细胞内的水逐渐膨胀，破坏了其中的结构(KarlssonToner,Biomaterials.1996Feb；17(3):243-56)。迅速冷冻是一种快速冷冻组织的技术，可将与缓慢冷冻相关的细胞损伤降至最低。但是，迅速冷冻需要使用液氮，这很危险并且需要大量劳动。在没有大量投资的情况下，在现有系统中将迅速冷冻作为标准诊断活检采样的一部分(与高度怀疑癌症诊断的情况相反)是不可行的。

本发明解决了与现有方法相关的问题。

发明内容

本发明提供了一种从固体组织样品中取样全部新鲜细胞的方法，该方法包括：

(i)将细胞从固体组织样品释放到溶液中，

(ii)将至少一部分溶液从固体组织样品中分离出来，以及

(iii)保留从固体组织样品分离的溶液。