[发明专利]用于逆转细胞老化的瞬时细胞重编程

权利要求书

1.一种使细胞更生的方法，所述方法包括用编码一种或多种细胞重编程因子的一种或多种非整合型信使RNA来转染细胞不超过五(5)个连续日，从而产生更生的细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述更生的细胞的转录组谱变得与年轻细胞的转录组谱更相似。

3.权利要求2的方法，其中所述更生的细胞的所述转录组谱包括选自RPL37、RHOA、SRSF3、EPHB4、ARHGAP18、RPL31、FKBP2、MAP1LC3B2、Elf1、Phf8、Pol2s2、Taf1和Sin3a的一种或多种基因的基因表达增加。

4.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出一种或多种核和/或表观遗传标志物的基因表达增加。

5.权利要求4的方法，其中所述标志物选自HP1γ、H3K9me3、层支持蛋白LAP2α和SIRT1蛋白。

6.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出蛋白水解活性增加。

7.权利要求6的方法，其中所述蛋白水解活性增加被测量为细胞自噬体形成增加、糜蛋白酶样蛋白酶体活性增加或其组合。

8.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出改善的线粒体健康和功能。

9.权利要求8的方法，其中改善的线粒体健康和功能被测量为线粒体膜电位升高、活性氧簇(ROS)减少或其组合。

10.权利要求1的方法，其中与参考值相比，所述更生的细胞呈现出一种或多种SASP细胞因子的表达降低。

11.权利要求10的方法，其中所述SASP细胞因子包括IL18、IL1A、GROA、IL22和IL9中的一种或多种。

12.权利要求1的方法，其中所述更生的细胞呈现出甲基化谱的逆转。

13.权利要求12的方法，其中所述甲基化谱的逆转通过Horvath钟估计来测量。

14.权利要求4的方法，其中所述参考值是从老化的细胞获得的。

15.权利要求1的方法，其中用信使RNA转染所述细胞包括选自以下的方法：lipofectamine和LT-1介导的转染、右旋糖酐介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、电穿孔、mRNA在脂质体中的包封和直接显微注射。

16.权利要求1的方法，其中所述一种或多种细胞重编程因子选自OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28和NANOG。

17.权利要求1的方法，其中所述一种或多种细胞重编程因子包括OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28和NANOG。

18.权利要求1的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

19.权利要求18的方法，其中所述细胞是人类细胞。

20.权利要求19的方法，其中所述细胞来自老年对象。

21.权利要求18的方法，其中所述细胞选自成纤维细胞、内皮细胞、软骨细胞、骨骼肌干细胞、角质化细胞、间充质干细胞和角膜上皮细胞。

22.权利要求21的方法，其中所述细胞是间充质干细胞。