[发明专利]诊断C3NeF介导的膜增生性肾小球肾炎的方法

权利要求书

1.一种诊断受试者中C3NeF介导的膜增生性肾小球肾炎(MPGN)的方法，包括：

a)在至少两个孔中固定C3b；

b)在所述孔中形成C3bBb复合物，其中所述复合物的形成是通过在因子B(FB)、因子D(FD)、镁离子的存在下添加从所述受试者和/或对照的生物样品中纯化的IgG来介导的；

c)使所形成的复合物脱离；

d)在变性条件下对所述复合物进行电泳并转移到膜上；

e)检测感兴趣的蛋白质Bb；

其中，测量的由所述孔中的每个收集的样品中Bb带的强度的比表示所述受试者中C3NeF活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤b)中所述孔进一步包括牛血清白蛋白(BSA)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，包括：

a)在至少两个孔中固定C3b；

b)在所述孔中形成所述C3bBb复合物，其是由在FB、FD、BSA和镁离子的存在下通过添加从所述受试者和/或对照的生物样品中纯化的IgG来介导的；

c)使所形成的复合物脱离；

d)在变性条件下对所述复合物进行电泳并转移到膜上；

e)检测感兴趣的蛋白质Bb，以获得作为基线的值；

其特征在于，在添加纯化的IgG的所述步骤b)之后，在一个或多个孔中，优选在洗涤步骤之后，在存在或没有FH的情况下进一步孵育，其中测量的经受所述进一步孵育的样品中的Bb带的强度与所述基线Bb带的比表示所述样品中C3NeF活性。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，在所述步骤b)期间进一步添加备解素。

5.根据权利要求1或2所述的方法，包括：

a)在至少两个孔中固定C3b；

b)在所述至少两个孔中添加FB、FD、BSA和镁离子；

c)在所述孔的至少第一个中，复合物形成和衰变步骤包括洗涤和在没有和/或存在FH的情况下与从所述样品中纯化的IgG孵育，以及在所述孔的至少第二个中，复合物形成和衰变步骤包括洗涤和在没有和/或存在FH的情况下与来自对照的纯化的IgG孵育；

d)使所形成的复合物脱离；

e)在变性条件下对所述复合物进行电泳并转移到膜上；

f)检测感兴趣的蛋白质Bb，以获得存在从受试者分离的IgG的情况下进行所述衰变步骤的所述至少第一个孔的Bb值，以及存在从对照中分离的IgG的情况下发生所述衰变步骤的所述至少第二个孔的Bb值，

其中，其中在存在从所述受试者分离的IgG的情况下进行所述衰变步骤的所述至少第一个孔的所述Bb带的强度与其中在有或没有FH的在存在从对照分离的IgG的情况下发生所述衰变步骤的至少第二个孔的所述Bb带的强度的比，表示所述受试者中C3NeF活性。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述样品为血清样品。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述检测使用抗人FB抗体进行。

8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述进一步孵育后的Bb带强度的值等于相对于在相同样品的基线中测量的值的至少34％或至少35％，优选至少37％，表示对于C3NeF介导的MPGN所述受试者为阳性。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，在存在FH的情况下进一步孵育后的Bb带强度的值等于相对于在相同样品的基线中测量的值的至少9％或至少10％，优选至少12％，表示对于C3NeF介导的MPGN所述受试者为阳性。

10.根据权利要求4所述的方法，其中，所述衰变前后Bb带的强度比的值，在没有FH的情况下，高于39％或40％，优选41％或42％，或者在存在FH的情况下大于8％、优选9％或10％，表示对于C3NeF介导的MPGN所述受试者为阳性。

11.根据权利要求5所述的方法，其中，所述比的值，在没有FH的情况下，等于至少1.6或至少1.7，优选至少1.9，以及在存在FH的情况下，等于至少2或至少2.1，优选至少2.3，表示C3NeF介导的MPGN。