[发明专利]经修饰的溶瘤腺病毒

说明书

本发明涉及经修饰的有复制能力的溶瘤腺病毒；包含其的药物组合物；以及使用其治疗癌症的方法。

技术领域

本发明涉及经修饰的有复制能力的溶瘤腺病毒；包含其的药物组合物；以及使用其治疗癌症的方法。

背景技术

在过去十年期间，对溶瘤病毒在癌症治疗中的作用的认知已经显著改变，因为免疫疗法和刺激患者自身的免疫系统以靶向和攻击癌症已经得到普及。在本世纪初，溶瘤病毒被认为是癌症治疗中的活性剂，仅通过它们经由溶瘤作用溶解肿瘤细胞的固有能力起作用。最近，它们作为癌症疫苗的用途已经引起了人们的兴趣，并且它们在溶瘤时从癌细胞释放肿瘤抗原以活化免疫系统的能力被认为是设计最终的针对癌症的免疫疗法的重要特征。

腺病毒是高度免疫原性的病毒，经常在针对传染性疾病的各种疫苗方法中用作载体。重要的是，它们具有引发和增强免疫应答的优异能力。此外，瘤内溶瘤腺病毒的存在和其引起的免疫原性细胞死亡可能通过引起TH1型免疫调节剂如干扰素γ(IFNγ)的表达，使不利的肿瘤微环境向更易发生临床相关抗肿瘤免疫的状态发展。免疫细胞对肿瘤的浸润是用溶瘤病毒治疗的常见结果，并且重要的是，腺病毒诱导CD8+ T细胞的浸润，CD8+T细胞是癌症免疫中的关键效应细胞。腺病毒引起免疫原性癌细胞溶解，随后将先前隐藏在免疫系统中或未呈现在免疫原性环境中的肿瘤抗原(包括独特的患者特异性新抗原)释放到免疫原性环境中。这是由溶瘤腺病毒引起的肿瘤特异性免疫应答的基础。

然而，肿瘤已经进化出几种免疫抑制机制来对抗机体的免疫细胞。免疫细胞表达调节其活化和效应子功能的细胞表面分子，尤其是共刺激和共抑制分子。负反馈分子，即检查点分子，能够在正常生理环境下产生自身耐受性，但经常被肿瘤细胞用来引起严重的免疫抑制。最具特征的检查点途径是细胞毒性T淋巴细胞蛋白4(CTLA-4)和程序性细胞死亡蛋白质1途径(PD-1/PD-L1)。由于瘤内有这些强免疫抑制机制，因此除非使用免疫刺激性转基因来增强，否则病毒诱导的抗肿瘤免疫应答可能会很弱。当前的方法解决了肿瘤部位的免疫抑制的问题，因为编码免疫刺激性人转基因的高免疫原性溶瘤腺病毒的存在使肿瘤微环境朝向对免疫治疗方法更敏感的“免疫发炎”表型发展。重要的是，当前方法的溶瘤病毒可与检查点调节剂如抗PD1、抗PD-L1或抗CTLA-4分子组合使用，以对抗免疫抑制性肿瘤环境并引起强的抗免疫应答。

发明内容

根据本发明的第一方面，提供在靶癌细胞中具有溶解活性的经修饰的复制型腺病毒，其包含：

a)E1A基因缺失，其中所述缺失是编码氨基酸923-946的核苷酸的缺失；

b)腺病毒纤维蛋白质的突结(knob)的5/3嵌合取代，其中血清型5Ad的突结被血清型3Ad的突结替代；

c)14.7k基因缺失，其中该缺失是关于野生型腺病毒的碱基对30448-30834的缺失，并且其中序列GGA GGA GAT GAC TGA(SEQ ID NO:1)取代GGA GGA GAC GAC TGA(SEQ IDNO:2)；以及

d)gp19k基因缺失和7.1k基因缺失，其中所述缺失是关于所述野生型腺病毒的碱基对28541-29211的缺失。

在以上修饰的腺病毒中，从野生型(wt)Ad5序列中缺失氨基酸923-946。这种缺失是安全措施：因为病毒E1A蛋白质不能结合成视网膜细胞瘤(Rb)分子并从Rb释放转录因子E2F用于病毒基因转录。因此，腺病毒依赖于宿主细胞中游离E2F的存在，并且可在分裂中的正常细胞中或癌细胞中复制其基因组，其中游离E2F是持续可用的。因此，修饰相对保护非分裂中的细胞并靶向分裂中的细胞或癌细胞。