[发明专利]新载体及其应用

权利要求书

1.表达载体，其包含下述(a)、(b)及(c)：

(a)翻译阻碍性二氢叶酸还原酶基因盒(翻译阻碍性DHFR基因盒)，其为密码子被改变的翻译阻碍性DHFR基因盒，其中，对于翻译阻碍性DHFR基因盒的密码子，丙氨酸被改变为GCA，精氨酸被改变为CGA，天冬酰胺被改变为AAU，天冬氨酸被改变为GAU，半胱氨酸被改变为UGU，谷氨酰胺为CAA，谷氨酸被改变为GAA，甘氨酸被改变为GGU，组氨酸被改变为CAU，亮氨酸被改变为UUA，赖氨酸被改变为AAA，脯氨酸被改变为CCA，苯丙氨酸被改变为UUU，丝氨酸被改变为UCA，苏氨酸被改变为ACU，酪氨酸被改变为UAU，和/或缬氨酸被改变为GUA，密码子的改变区域为从DHFR基因的5′末端起的DHFR基因的全长的30％以上；

(b)基因盒，其在转录活性启动子和稳定性聚腺苷酸化信号之间包含外源基因导入用克隆位点；及

(c)遍在染色质开放元件(UCOE)。

2.根据权利要求1所述的表达载体，其中，在权利要求1(a)中所述的翻译阻碍性DHFR基因盒中，作为启动子使用源自非哺乳动物细胞的基因的启动子，或除去增强子部分的启动子。

3.根据权利要求1或2所述的表达载体，其中，UCOE中包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

4.生产来自外源基因的蛋白质的转化体的制备方法，包括向权利要求1～3中任一项所述的表达载体引入外源基因的工序，及通过该表达载体转化二氢叶酸还原酶基因缺陷宿主细胞的工序。

5.来自外源基因的蛋白质的生产方法，包括以下(a)～(d)工序，

(a)在权利要求1～3中任一项所述的表达载体中引入外源基因的工序，

(b)通过该表达载体转化二氢叶酸还原酶基因缺陷宿主细胞的工序，

(c)将该转化体在不含次黄嘌呤-胸苷的培养基中培养的工序，

(d)从培养的转化体回收来自外源基因的蛋白质的工序。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，在权利要求5(c)工序中，通过化学成分确定的培养基(CD培养基)或者在CD培养基中加入有非动物性的添加物的培养基进行培养。

7.生产来自外源基因的蛋白质的转化体的筛选方法，包括以下(a)～(c)工序：

(a)在权利要求1～3中任一项所述的表达载体中引入外源基因的工序，

(b)通过该表达载体转化二氢叶酸还原酶基因缺陷宿主细胞的工序，

(c)将该转化体在不含次黄嘌呤-胸苷的培养基中培养的工序。

8.外源基因表达载体，其在权利要求1～3中任一项所述的表达载体中引入有外源基因。

9.宿主细胞，其通过权利要求8所述的外源基因表达载体转化。