[发明专利]C-5甾醇去饱和的优化

权利要求书

1.一种产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞包含具有C5-甾醇去饱和酶活性的酶，所述酶与在用于生产7-脱氢胆固醇(7-DHC)的合适宿主细胞中(异源)表达的SEQ ID NO:2具有至少约45％，例如至少50％、52％、60％、70％、80％、90％、92％、95％、98％或至多100％的同一性，其中与未修饰的宿主细胞相比，7-DHC与包括羊毛甾醇和/或烯胆甾烷醇在内的副产物的比率增大了至少约5％。

2.根据权利要求1所述的产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞包含具有C5-甾醇去饱和酶活性的酶，所述酵母细胞产生甾醇混合物，基于甾醇总量，所述甾醇混合物包含至少约84％的7-DHC，优选地包含至少约85％、88％、90％、92％、95％、97％、98％或至多100％的7-DHC。

3.根据权利要求1或2所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中7-DHC与胆甾-7-烯醇和/或羊毛甾醇的比率在约18的范围内。

4.根据权利要求1或2所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中7-DHC与胆甾-7-烯醇和/或羊毛甾醇的比率增加了至少约5％。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞表达具有C5-甾醇去饱和酶活性的异源酶，所述异源酶与SEQ ID NO:2具有至少约45％，例如至少50％、52％、60％、70％、80％、90％、92％、95％、98％或至多100％的同一性。

6.根据权利要求4所述的产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞表达具有C5-甾醇去饱和酶活性的异源酶，所述酶选自由以下项组成的组：酵母属，例如酿酒酵母；耶氏酵母属，例如脂解耶氏酵母；克鲁维酵母属，例如乳酸克鲁维酵母；裂殖酵母属，例如粟酒裂殖酵母；毕赤酵母属，例如巴斯德毕赤酵母；假丝酵母属，例如白假丝酵母；青霉菌属，例如娄地青霉；曲霉属，例如构巢曲霉；隐球菌属，例如新型隐球菌；例如稻热病菌(Magneporte oryzae)；绿僵菌属，例如蝗绿僵菌；以及黑粉菌属，例如玉米黑粉菌。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中ERG5和ERG6被灭活。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中所述酵母细胞表达选自具有甾醇Δ24还原酶活性的EC 1.3.1.72的异源酶，优选地其中所述异源酶源自植物或脊椎动物，更优选地源自人、猪、狗、小鼠、大鼠、马或斑马鱼。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中所述酵母细胞表达具有C8-异构酶活性的异源酶，优选地其中所述异源酶可获自玉米黑粉菌，更优选地来自与根据SEQ ID NO:14的多肽具有至少约42％，例如至少43％、44％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、75％、80％、90％、92％、95％、98％或至多100％同一性的多肽。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞用于生产甾醇，优选地用于生产维生素D3前体，更优选地用于生产7-DHC的用途。

11.根据权利要求10所述的产生胆固醇的酵母细胞的用途，其中所述7-DHC被进一步转换为维生素D3。

12.根据权利要求10或11所述的用途，其中所述7-DHC被进一步转换为25-羟基维生素D3。