[发明专利]用于检测寡核苷酸缀合物的方法

权利要求书

1.一种用于检测溶液中至少一种所关注的寡核苷酸缀合物的方法，其中所述所关注的寡核苷酸缀合物由核酸实体和非极性实体组成，其中所述核酸实体化学连接至所述非极性实体，并且其中所述方法包含以下步骤：

a)提供包含所述所关注的寡核苷酸缀合物的液体样品；

b)在包括溶液中至少一种环糊精存在的条件下，通过分析方法从所述液体样品中分离出所述所关注的寡核苷酸缀合物；

c)借助于定性或定量分析检测所述所关注的寡核苷酸缀合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)的所述分析方法选自由以下组成的群组：阴离子交换高效液相色谱法(AEX-HPLC)、尺寸排阻液相色谱法(SEC-LC)、反相高效液相色谱法(RP-HPLC)、离子对反相高效液相色谱法(IP-RP-HPLC)和毛细管凝胶电泳(CGE)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述寡核苷酸缀合物的所述核酸实体由DNA或RNA核苷酸或其任意组合构成，优选地，其中所述核酸实体是化学合成的寡核苷酸，更优选地，包含经修饰的DNA核苷酸和/或经修饰的RNA核苷酸或由经修饰的DNA核苷酸和/或经修饰的RNA核苷酸组成的化学合成的寡核苷酸。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述核酸实体具有6至150个核苷酸、优选10至80个核苷酸、更优选12至50个核苷酸的长度。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中步骤c)还包括检测所述所关注的寡核苷酸缀合物的杂质，优选地，其中所述杂质由至少一种非全长核酸实体构成或组成，更优选地，呈一种或多种非全长合成产物的形式，甚至更优选地，具有与全长合成产物不同的长度或结构，或其任何组合。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述非极性实体是亲脂性或疏水性实体，优选地，其中所述非极性实体选自由以下组成的群组：胆固醇，生育酚和氟喹诺酮，更优选地，其中所述非极性实体是胆固醇。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中

i)阴离子交换高效液相色谱法(AEX-HPLC)在10℃至90℃的温度下、优选在30℃至75℃的温度下、优选在环境温度下进行；

ii)尺寸排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC)在10℃至50℃的温度下、优选在20℃至40℃的温度下进行；

iii)反相高效液相色谱法(RP-HPLC)在10℃至100℃的温度下、优选在40℃至70℃的温度下进行；

iv)离子对反相高效液相色谱法(IP-RP-HPLC)在10℃至100℃的温度下、优选在30℃至85℃的温度下进行；

v)毛细管凝胶电泳(CGE)在10℃至60℃的温度下、优选在30℃至50℃的温度下进行。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述至少一种环糊精选自由以下组成的群组：环糊精的α、β、γ或δ变体，优选地，其中所述至少一种环糊精呈甲基-β环糊精形式。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中溶液中的所述至少一种环糊精以0.01mM至50mM的最终浓度存在，优选以0.5mM至25mM的最终浓度存在，更优选以10mM至25mM的最终浓度存在，最优选以20mM的最终浓度存在。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在进行步骤b)之前将所述至少一种环糊精添加到所述液体样品中。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中步骤c)中的所述检测借助于UV读数，借助于荧光读数或借助于质谱(MS)或任何类似方法来进行。