[发明专利]眼细胞的分化方法及其用途在审
| 申请号： | 201980035975.9 | 申请日： | 2019-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN112204134A | 公开（公告）日： | 2021-01-08 |
| 发明（设计）人： | L·蔡斯;K·华莱士;B·梅林;A·迪亚斯;B·雪莱;M·芬;D·菲利普斯;M·斯特恩菲尔德;N·迈耶 | 申请（专利权）人： | 富士胶片细胞动力公司 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 陈晓娜 |
| 地址： | 美国威*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞 分化 方法 及其 用途 | ||
1.一种产生神经视网膜祖细胞(NRP)群体的方法，包括：
(a)获得人诱导性多能干细胞(iPSC)的起始群体；
(b)将所述细胞培养在包含BMP抑制剂的第一视网膜分化培养基(RD1)中以进一步将所述细胞分化成前神经外胚层细胞；
(c)通过将所述细胞培养在基本上不含BMP抑制剂的第二视网膜分化培养基(RD2)中诱导所述前神经外胚层细胞的视网膜分化，从而形成视网膜祖细胞(RPC)；以及
(d)将所述RPC培养在视网膜成熟(RM)培养基中以产生NRP。
2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括在将所述iPSC培养在RD1中之前将所述细胞培养在视网膜诱导培养基(RIM)中，以启动所述细胞分化成前神经外胚层细胞。
3.根据权利要求1所述的方法，进一步包括将NRP群体作为悬浮聚集体培养在包含γ-分泌酶抑制剂和ROCK抑制剂的培养基中。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(a)-(d)的培养进一步限定为贴壁二维培养。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述RIM包含BMP抑制剂、TGFβ抑制剂和/或IGF-1。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述RIM进一步包含WNT抑制剂。
7.根据权利要求5所述的方法，其中RIM基本上不含或不含CKI-7。
8.根据权利要求2所述的方法，其中所述RIM基本上不含激活素A。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述RD1培养基进一步包含TGFβ抑制剂、Wnt抑制剂和MEK抑制剂。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述RD1进一步包含Wnt抑制剂。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述RD1基本上不含Wnt抑制剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述RD1基本上不含或不含CKI-7。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述RD2培养基包含TGFβ抑制剂、Wnt抑制剂和MEK抑制剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述RD2培养基基本上不含LDN193189。
15.根据权利要求1所述的方法，其中所述RM培养基包含烟酰胺和抗坏血酸。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述RM培养基进一步包含FGF和TGFβ抑制剂。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中所述RM培养基进一步包含γ-分泌酶抑制剂。
18.根据权利要求1所述的方法，进一步包括检测所述前神经外胚层细胞的VSX2表达增加，以确定分化潜能。
19.根据权利要求1所述的方法，其中在RD2中培养后至少90％的所述细胞表达PMEL17。
20.根据权利要求1所述的方法，其中在RD2中培养后至少30％的所述细胞表达VSX2。
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述RPC表达PAX6、MITF和/或PMEL。
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