[发明专利]用于快速乙型流感诊断测试的抗体对

说明书

用于乙型流感诊断测试的新抗体对。

发明概述

本发明涉及单克隆抗体(mAb)种类的新选择，其提供了用于检测生物学样品中的人乙型流感的高度灵敏性免疫层析测定法(以下称为“免疫测定法”)。当在“三明治型”侧向流免疫测定法(LFIA)中作为检测和捕捉试剂配对使用时，所述mAb种类是特别有用的，例如在所谓的“快速流感诊断测试”(RIDT)(也称为“接近患者”或“护理点”测试(POCT)或“浸渍片”，参见WHO论文，“Use of Influenza Rapid Diagnostic Tests”(2010))中通常使用。

本发明的新mAb选择，在本文中也称为“抗体(或mAb)对”或“匹配的抗体对”选自对病毒核蛋白(NP)(也称为核壳蛋白或蛋白N)具有结合亲和力的种类，所述病毒核蛋白是一种跨乙型流感的高度保守的蛋白，其可用于区分甲型和乙型流感，并且已成为上市RIDT的常见靶标(WHO，2010，第11页)。

尽管当前可用的RIDT对季节性流感，即针对感染上呼吸道的呼吸道病毒和细菌具有特异性(中位数90–95％)，但是与RT-PCR或病毒培养相比灵敏性却高度可变(即10-96％)。低灵敏性产生假阴性结果的严重风险。

我们已经鉴定出某些匹配的抗体对，用作“三明治型”免疫测定法的试剂，令人惊讶地，它们提供了每毫升样品低至约10纳克病毒蛋白的活病毒检测限(LOD)，据我们至今所知大大改善可用RIDT的灵敏性。

仅使用特定匹配的抗体对分别作为检测抗体和捕捉抗体就实现此种非常低的LOD，并且基于单独的个别抗体的结合亲和力尚不能进行预测。

此外，出乎意料的是，如本发明所要求的，可以用结合NP的相邻或甚至相同结合抗原性表位的抗体对实现如此高的灵敏性。

事后看来，根据本发明的知识，尽管无意于被束缚，但可以假设，通常预期会抑制此类抗体对与单体形式的NP的同时结合的位阻可被在某些条件下形成暴露额外的抗体结合位点的多价复合物的NP寡聚体形成抵消。

本发明的匹配的抗体对表现出的高灵敏性特别有利于即使在低病毒滴度的生物流体中也易于检测病毒，所述生物流体例如可以由消费者相对无创地自我采样，例如通过擦拭粘膜液诸如鼻液或唾液。

因此，本发明一般涉及：用于检测样品(特别是包含活病毒的生物样品)中存在的乙型流感的匹配抗体对；和包含所述匹配的抗体对作为检测和捕捉试剂的免疫测定法，尤其是三明治型的免疫测定法，最优选三明治型的LFIA。

一方面，本发明包括匹配的抗体对，其用作LFIA中的相应检测和捕捉抗体，以检测样品中存在的乙型流感的核蛋白(NP)抗原，其中所述匹配的抗体对的抗体独立地能够结合包含乙型流感核蛋白的连续位置氨基酸1-80的区域中的NP表位，如SEQ.ID.No:1所示。

在另一方面，本发明包含三元复合物作为新型物质组合物，其在三明治型LFIA的运行中产生，所述三元复合物包含：

(a)乙型流感核蛋白

(b)与可检测信号缀合或以其他方式关联的至少一种“检测抗体”；和

(c)至少一种任选地固定化在基底上的“捕捉抗体”，

其中(b)和(c)独立能够结合包含乙型流感核蛋白的氨基酸1-80的区域中(a)的表位，从而形成所述三元复合物。

本发明还包含含有免疫层析材料的基底，所述免疫层析材料上具有通过其捕捉抗体(c)固定化的上述三元复合物。

本发明进一步包括用于检测样品中乙型流感的核蛋白(NP)的侧向流免疫测定法，其包含：

(a)流动相，其包含与可检测信号缀合或以其他方式关联的检测抗体，所述检测抗体能够结合NP以形成二元复合物；和