[发明专利]杂交有机体的稀有产物的鉴定

说明书

本发明涉及基于用染料，优选荧光染料对亲本细胞进行染色以鉴定杂种有机体的方法。优选的染料是琥珀酰亚胺酯偶联的染料。本发明还涉及标记有染料的所得杂种有机体，优选种间杂种有机体。

本发明涉及有机体领域，特别是微生物如酵母领域。更具体地，本发明涉及杂种有机体的产生和鉴定，特别是如通过稀有交配事件产生的种间杂种的产生和鉴定。

酵母属的酵母被广泛用于各种生物技术产业，包括啤酒酿造[Krogerus等人,2017.Appl Microbiol Biotechnol 101:65-78]、葡萄酒酿造[Marsit和Dequin,2015.FEMSYeast Res 15:72]、生物药物蛋白的生产[Nielsen,2013.Bioengin 4:207-211]以及第一代和第二代生物燃料的合成[Balat,2011.Energy Conv Management 52:858-875；Jansen等人,2017.FEMS Yeast Res 17:Fox044]。狭义酵母属(Saccharomyces sensu stricto)复合体涵盖9种不同的物种：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、奇异酵母(S.paradoxus)、里约酵母(S.cariocanus)、葡萄汁酵母(S.uvarum)、米卡塔酵母(S.mikatae)、库德里阿兹威酵母(S.kudriavzevii)、S.arboricola、真贝酵母(S.eubayanus)和最近发现的S.Jurei[Hittinger,2013.Trends Genet 29:309-317；Naseeb等人,2017.Int J Syst Evol Microbiol 67:2046-2052]。在不同的酵母物种之间存在合子后屏障，这意味着在物种之间进行种间交配是可能的，但产生了不育的后代[Greig等人,2002.Proc Royal Society London B:Biology Sciences 269:1167-1171；Hou等人,2014.Current Biol 24:1153-1159]。尽管在不同的自然环境中已经发现了一些种间杂种，如在黄蜂的肠中[Stefanini等人,2016.PNAS 113:2247-2251]，但在驯养环境中最常见酵母杂种，并用于各种工业发酵过程[Boynton和Greig,2014.Yeast,31:449-462；Gorter de Vries等人,2017.Applied Environm Microbiol83:e03206-16]。例如，用酿酒酵母和真贝酵母之间的杂种巴斯德酵母(S.pastorianus)进行Lager酿造[Libkind等人,2011.PNAS 108:14539-14544]，其将酿酒酵母的发酵能力和糖利用与真贝酵母的耐冻性相结合[Hebly等人,2015.FEMS Yeast Res 15:fov005]。已经从葡萄酒发酵中分离出酿酒酵母、库德里阿兹威酵母和葡萄汁酵母之间的各种双交种和三交种，并且其似乎在香味产生中起重要作用[González等人,2006.FEMS Yeast Res 6:1221-1234]。杂交对驯化的酵母菌株的遗传变异的另一个重要贡献是基因渗入，其由种间杂交以及之后多轮的与亲本菌株之一回交引起。这种渗入在许多驯化的酵母菌株中是常见的，并且有助于例如苹果酒发酵葡萄汁酵母菌株和葡萄酒发酵酿酒酵母菌株的独特表型[Naumova等人,2011.ResearchMicrobiol 162:204-213；Dunn等人,2012.Genome Res 22:908-924]。