[发明专利]在体外将原始生殖细胞分化为原始卵泡的方法

说明书

一种在体外将原始生殖细胞分化为原始卵泡的方法，所述方法为将原始生殖细胞以及邻接于所述原始生殖细胞的支持细胞在加压条件下或低氧气浓度下培养的方法。

技术领域

本发明涉及一种在体外将原始生殖细胞分化为原始卵泡的方法。本申请主张基于2018年6月21日在日本申请的特愿2018-117988号的优先权，在此引用其内容。

背景技术

生物体内存在构成身体的体细胞以及将遗传讯息传递至下一世代的生殖细胞。尤其，雌性生殖细胞的卵子是在完成早期发育中扮演重要角色的细胞。哺乳类中的雌性生殖细胞的经历为，在胚胎期时原始生殖细胞增殖，而后进入减数分裂，大部分的细胞几乎在出生同时死亡。残存的卵母细胞同时形成原始卵泡以及周围的颗粒细胞。此种雌性生殖细胞为，在胚胎期的原始生殖细胞达到高峰并减少，出生后维持有限数量的卵母细胞，并且通过使一部分细胞周期性活化以维持排卵周期。此种排卵周期的起点为原始卵泡，卵母细胞以受一层扁平状颗粒细胞包围的状态存在于卵巢皮质。并且，在排卵周期中，原始卵泡发育为初级卵泡、次级卵泡、囊状卵泡、格拉夫氏卵泡(成熟卵泡)，并且排卵。然而，目前不知道原始卵泡的维持以及活性化机制的全貌。因此，确立从原始生殖细胞分化为原始卵泡的体外培养法，可能是解析原始卵泡的维持以及活性化机制的方法。进一步地，若能确立此种培养法，则可以在生体内以及体外持续性地形成卵子。

近年来，确立了从原始生殖细胞分化为功能性成熟卵母细胞的培养方法(举例而言，参照专利文献1以及非专利文献1)。

【背景技术文献】

【专利文献】

【专利文献1】国际公开第2017/047799号

【非专利文献】

【非专利文献1】Morohaku K.et al.，″Complete in vitro generation offertile oocytes from mouse primordial germ cells.″，Proc Natl Acad Sci，Vol.113，No.32，p9021-9026，2016.

发明内容

然而，在专利文献1以及非专利文献1记载的方法中，并未确认原始卵泡的形成，且功能性卵子的形成是瞬间性的。

本发明是鉴于上述事项而完成，且提供一种在体外将原始生殖细胞分化为原始卵泡的方法。

发明人为了达成上述目的而努力进行研究的结果，发现通过在加压条件或低氧气浓度条件下培养原始生殖细胞以及邻接于所述原始生殖细胞的支持细胞，可以形成原始卵泡，据此完成本发明。

此即，本发明包含以下样态。

根据本发明的第1样态的方法为一种在体外将原始生殖细胞分化为原始卵泡的方法，所述方法为将原始生殖细胞以及邻接于所述原始生殖细胞的支持细胞在加压条件下或低氧气浓度下培养的方法。

在根据上述第1样态的方法中，所述培养可以在加压条件下以及低氧气浓度下进行。

在根据上述第1样态的方法中，所述培养可以在PI3激酶抑制剂存在下进行。

在根据上述第1样态的方法中，所述PI3激酶抑制剂可以为Y294002。

在根据上述第1样态的方法中，所述培养可以在排除雌性激素或与所述雌性激素具有类似功能的因子的条件下进行。

在根据上述第1样态的方法中，所述低氧气浓度条件可以为，在培养环境中的氧气浓度在7％以下的条件。

在根据上述第1样态的方法中，所述低氧气浓度条件可以为，在培养环境中的氧气浓度在3％以上7％以下的条件。

在根据上述第1样态的方法中，所述加压条件可以为，23kPa以上40kPa以下的条件。