[发明专利]使用变异VHH抗体的亲和载体

说明书

本发明提供一种使用变异VHH抗体的亲和载体。该亲和载体包含固相载体和结合于该固相载体的免疫球蛋白结合蛋白质，该免疫球蛋白结合蛋白质包含VHH抗体的变异体或其片段，该VHH抗体的变异体或其片段识别选自序列号22的氨基酸序列的127～184位和序列号23的氨基酸序列的13～210位中的至少1个区域的表位。

技术领域

本发明涉及使用变异VHH抗体的亲和载体以及使用该亲和载体的目标物质的分离方法。

背景技术

以抗体医药为代表的蛋白质制剂基本上是单克隆抗体，使用细胞培养技术大量地生产。在这些抗体医药的制造工序的初期纯化工序，一般利用亲和色谱。现在，上市的主要的抗体医药为免疫球蛋白G(IgG)亚类，其初期纯化中，广泛利用将由革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)生产的作为细胞壁蛋白质的1种的蛋白A用作配体的亲和色谱。另一方面，近年来，出于抗体医药的高功能化的目的，正在积极地进行部分化抗体、抗体药物复合体、双重特异性抗体等修饰抗体的开发。为了这些修饰抗体的亲和纯化，也开发并上市了利用了与蛋白A不同的性质的配体的亲和载体。

VHH(variable domain of heavy chain of heavy chain antibody)是偶蹄目骆驼科动物(双峰骆驼、单峰骆驼、无峰骆驼等)的血清中所含的、包含不具有轻链的重链抗体的可变区的结构域。VHH作为能够结合于抗原的免疫球蛋白片段，是最小的单位，作为抗体医药、亲和载体的配体是有用的。

发明内容

本发明提供固定有作为抗体结合性配体是有用的VHH抗体变异体的亲和载体。

本发明提供以下方案。

〔1〕一种亲和载体，包含固相载体和结合于该固相载体的免疫球蛋白结合蛋白质，

该免疫球蛋白结合蛋白质包含VHH抗体的变异体或其片段，该VHH抗体的变异体或其片段识别选自序列号22的氨基酸序列的127～184位和序列号23的氨基酸序列的13～210位中的至少1个区域的表位。

〔2〕根据〔1〕所述的亲和载体，其中，所述VHH抗体变异体具有对变异前的VHH抗体插入有至少1个组氨酸或将至少1个氨基酸残基置换为组氨酸的互补决定区。

〔3〕根据〔2〕所述的亲和载体，其中，所述变异前的VHH抗体是由与序列号1～4中的任一氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列构成且对曲妥珠单抗的Fab区域具有亲和性的多肽。

〔4〕根据〔2〕或〔3〕所述的亲和载体，其中，所述互补决定区为CDR3。

〔5〕根据〔4〕所述的亲和载体，其中，所述VHH抗体变异体是由在与所述序列号1的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列中将选自相当于序列号1的氨基酸序列的97位的位置、相当于100位的位置和相当于102位的位置中的至少1个位置的氨基酸残基置换为组氨酸的氨基酸序列构成的多肽。

〔6〕根据〔3〕～〔5〕中任一项所述的亲和载体，其中，与所述序列号1的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列在相当于序列号1的26～35位区域的CDR1区域具有序列号10的氨基酸序列，在相当于序列号1的51～65位区域的CDR2区域具有序列号11的氨基酸序列，在相当于序列号1的96～107位区域的CDR3区域具有序列号12的氨基酸序列，

与所述序列号2的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列在相当于序列号2的26～37位区域的CDR1区域具有序列号13的氨基酸序列，在相当于序列号2的53～68位区域的CDR2区域具有序列号14的氨基酸序列，在相当于序列号2的99～118位区域的CDR3区域具有序列号15的氨基酸序列，