[发明专利]蛋白质大环化

权利要求书

1.一种提高蛋白质的稳定性的方法，其中，所述蛋白质包含至少70个氨基酸，所述方法包括：

-a)提供包含三个半胱氨酸残基的蛋白质，和

-b)使所述蛋白质与三价硫醇基反应性交联剂接触，使得所述交联剂与三个半胱氨酸残基的每一个形成共价键，优选地，与非交联的蛋白质相比，所述方法提高蛋白质三级结构的稳定性。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤a)包括修饰蛋白质以引入三个半胱氨酸残基中的一个或多个。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述蛋白质包含至少第四半胱氨酸残基，并且其中所述方法不导致在第四半胱氨酸和交联剂之间形成共价键。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述蛋白质是酶，所述第四半胱氨酸是酶活性位点的一部分。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述交联剂具有C₃对称性。

6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述交联剂具有式(I)：

其中，

Q是选自以下的核心结构：

Q中的每条虚线表示Q结合到L的位点，

每个L是独立地选自以下的接头：

其中，

每个U独立地选自CH₂和CF₂，

V是CH₂，

W是CF₂，

X是NR、NH或O，

其中R是荧光团或亲和柄，

n是2-8的整数，

m是1-4的整数，

o是2或3，和

v是2或3，

L中的每条虚线表示L结合到Q或E的位点，

每个E是亲电子试剂，独立地选自：

其中，

每个X独立地选自NH和O，

Y选自：F、Cl、Br、Tos(O-SO₂-C₆H₄-CH₃)和Mes(O-SO₂-CH₃)，

Z是CH₂、NH-C(O)-CH₂或O-C(O)-CH₂，

E中的每条虚线表示E结合到L的位点。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述交联剂具有式(III)：

其中n是1或n是2。

8.通过前述权利要求中任一项所述的方法获得的稳定化的蛋白质。