[发明专利]用于选择性裂解血细胞和分离微生物细胞的方法和组合物

说明书

提供了用于选择性裂解真核细胞和分离微生物细胞的方法和组合物。样本中的血细胞和/或其它真核细胞可以通过向样本中加入包括皂苷和碱性缓冲液的血液裂解试剂，以及任选的聚茴香脑磺酸钠和非离子表面活性剂来选择性地裂解，从而形成混合物，并搅拌该混合物。然后可以例如使用分离方法如离心或过滤分离混合物中的微生物细胞，并任选地在生长培养基中检测或培养。提供了适于在与样本混合时保持微生物细胞完整性的血液裂解试剂组合物。在其中样本是血液样本的示例性实施方案中，可以选择血液裂解试剂组合物以避免或减少在离心或过滤时可见的血液碎片的存在。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年5月25日提交的题为“真核细胞选择性裂解的方法和组合物(METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE LYSIS OF EUKARYOTIC CELLS)”的美国临时专利申请62/676,771号的优先权，其全部内容通过引用并入本文，还要求于2018年12月6日提交的题为“选择性裂解血细胞和分离微生物细胞的方法和组合物(METHODS ANDCOMPOSITIONS FOR THE SELECTIVE LYSIS OF BLOOD CELLS AND SEPARATION OFMICROBIAL CELLS)”的美国临时专利申请62/776,126号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

背景技术

耐药性病原体的出现是一场全球性的医疗危机，迫使医生使用更有效的抗生素治疗常见的传染病。这在很大程度上是因为识别致病菌的复杂性和所需的时间，迫使医生在知道培养样本中的高阴性率的情况下，仍然凭经验开出处方。最终结果是由于服用广谱和不必要的抗生素带来了副作用风险，耐药菌株的出现显著增加，治疗成本更高，回收周期更长。

在治疗出现脓毒症或感染性休克症状的患者时，通常会开出广谱抗生素。鉴于这些情况的严重性，医生通常会立即开出一种或多种广谱抗生素，并且在药物的全部效果得到评估或微生物学结果出来之前，不太可能改变治疗方案。例如，文件“拯救脓毒症战役指南”(SSCG)推荐了一种治疗方案，在该方案中，静脉注射抗生素(由一种或多种针对可能的细菌/真菌病原体的广谱药物组成)应在发现严重脓毒症和感染性休克后的第一个小时内开始使用[R.P.Dellinger等人，《危重病急救医学》(Crit.Care Med)2008]治疗方案规定，每天都要重新评估抗菌方案，一旦知道病原体，作为良好的做法，就应该使用更合适的窄谱抗菌药。

遗憾的是，目前的临床细菌学方法通常在可能为时已晚而无法影响患者预后时提供病原体鉴定信息。这是由于从标本采集到报告病原体鉴定和药敏试验结果有2-3天的时间滞后。时间滞后的原因包括需要将样本运送至临床化验室，并配备专业临床微生物学家，以及在固体培养基上继代培养样本后，血液培养和随后的菌落形成所需的时间。虽然建议尽快将接种的血液培养瓶运送到临床微生物实验室，最好是在2小时内，但在正常工作时间之后到达临床微生物实验室的样本通常会被保存一夜，直到第二天工作人员到达。血液培养阳性对于细菌通常需要至少8-18小时，对于真菌通常需要1-3天。在获得阳性血培养后，一旦标本在固体琼脂上继代培养，细菌至少需要8-12小时，真菌需要1-4天才能形成菌落。对平板进行检查，并选择合适的菌落进行鉴定和药敏试验。这一过程还需要在报告发布之前进行分析和解释，通常是在第3天，这可能太慢了，以至于不能对抗生素选择和患者结果产生有意义的影响。

虽然临床微生物学实验室工作流程的许多方面已经自动化，但临床细菌学仍然是高度劳动密集型的。目前，许多实验室使用Vitek(BioMérieux)或Phoenix(Becton-Dickenson)仪器自动进行鉴定和药敏试验。然而，这些系统，以及基于质谱学的较新系统，仍然依赖于专家人员从琼脂平板中选择合适的菌落。

正在出现的新技术有助于直接快速识别未经处理的样本中的病原体，例如直接从全血中鉴定病原体。这种快速方法通常采用最初的细胞裂解步骤，包括选择性裂解哺乳动物细胞的试剂，同时试图将对样本中微生物细胞的完整性影响降至最低。

发明内容