[发明专利]用于制备多核苷酸的方法和组合物

说明书

本文提供了用于形成扩增产物的方法、组合物和试剂盒。在本文提供的各种实施方案中，包含转座酶的转座体用于形成标签化多核苷酸，以用于下游扩增和多核苷酸加工步骤。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年4月27日提交的美国临时申请序列号62/663,967的优先权，该美国临时申请通过引用以其全部内容合并于本文。

序列表

本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且由此通过引用以其整体并入。所述ASCII副本创建于2019年4月23日，名为53081-702_601_SL.txt，大小为1,176字节。

背景技术

例如在测序文库的产生中，转座酶介导的多核苷酸的片段化和标签化可用于多核苷酸的制备中。标签化(tagmentation)提供的优点在于样品制备和工作流程简化，其中可在单个反应中将待测序的多核苷酸进行片段化和标签化。可在测序之前将这些所产生的多核苷酸进一步扩增和/或进行序列特异性选择。多核苷酸的序列信息可用于鉴定用于诊断、治疗、司法鉴定和许多其他应用的序列变体。

简单而快速的样品制备可用于分析多核苷酸样品。多核苷酸样品可以并行或批量处理，例如，以高通量复用的方式处理。然而，现有的制备核酸样品的方法经常受许多缺点的困扰。其中包括低产率和需要大量起始原料。

发明内容

鉴于上述情况，需要用于加工多核苷酸的改进方法。本文提供的方法、组合物、反应混合物和试剂盒满足了这一需求，并且还提供了另外的优点。

在一方面，本公开提供了一种表征样品中的多核苷酸的方法。该方法包括(a)使样品中的双链多核苷酸与第一组转座体复合物接触，所述第一组包含具有第一转座子序列的转座体复合物，以产生在5'端包含所述第一转座子序列的第一多个突出端片段；(b)使所述第一多个突出端片段进行延伸反应以产生第一多个平端片段；(c)用包含所述第一转座子序列或其一部分的引物进行引物指引的延伸反应，以产生所述第一多个平端片段或其片段的拷贝；(d)使所述第一多个平端片段或其片段与第二组转座体复合物接触，所述第二组包含具有第二转座子序列的转座体复合物，以产生在5'端包含所述第二转座子序列的第二个多个突出端片段；(e)使所述第二多个突出端片段进行另外的延伸反应，以产生第二多个平端片段；和(f)从所述第二多个平端片段或其衍生物产生序列读取，从而表征所述样品中的所述双链多核苷酸。在一些实施方案中，第一转座子序列和第二转座子序列不相同。在一些实施方案中，第二组还包含具有第一转座子序列的转座体复合物。在一些实施方案中，第二组还包含具有第三转座子序列的转座体复合物。