[发明专利]生物样品中(1→3)-β-D-葡聚糖的免疫分析方法、(1→3)-β-D-葡聚糖分析试剂盒以及(1→3)-β-D-葡聚糖免疫分析方法中使用的生物样品碱性预处理溶液

说明书

本文要解决的问题是进行生物样品中的BG的免疫分析方法，该方法操作简单且灵敏度与鲎试剂相当。该问题可以通过将碱性溶液预处理生物样品结合使用与BG特异性反应的抗BG单克隆抗体来解决。

技术领域

本发明涉及生物样品中的(1→3)-β-D-葡聚糖(以下有时简称为BG)的免疫分析方法。本发明还涉及用于生物样品中BG免疫分析的试剂盒和生物样品中BG免疫分析方法中使用的生物样品碱性预处理溶液。

背景技术

β-D-葡聚糖是其中多个葡萄糖分子通过β键结合的葡萄糖聚合物。葡萄糖的1位碳原子可与另一个葡萄糖的5个碳原子中的每一个结合，即1位碳原子、2位碳原子、3位碳原子、4位碳原子和6位碳原子。据报道，1位和3位(1→3)、1位和4位(1→4)或1位和6位(1→6)的结合组合经常出现在天然β-D-葡聚糖中。

β-D-葡聚糖是真菌的细胞壁组成成分，是其他微生物(如细菌)中找不到的特征性物质。由于此特征，β-D-葡聚糖分析法已用于深部真菌病的检测。深部真菌病是一种机会性感染，患者由于抵抗力减弱而导致免疫功能失调，患者陷入极为危急的状态。深部真菌病的典型致病真菌的实例包括念珠菌属(Candida)和曲霉属(Aspergillus)。由于存在BG是这些致病生物的细胞壁所共有的，因此测量体液中的BG已用于深部真菌病感染的辅助诊断。

目前，利用鲎(horseshoe crab)对BG的保护反应的鲎(Limulus)试剂用于检测深部真菌病(专利文献1和2)。该鲎试剂被批准用作体外诊断。但是，使用这种鲎试剂的方法需要天然资源鲎的血液，因此除了引起资源枯竭的问题之外，维持特定品质的成本也很高。该方法的另一个缺点是由于该技术需要多个步骤，因此易于发生分散。

近年来，为了消除鲎试剂的缺点并更快速、更容易地测量BG，试图通过使用识别BG的抗体来测量BG(专利文献3和4，非专利文献1至3)。然而，就BG测量灵敏度而言，这些方法中使用的抗体远不如鲎试剂。因此，尚不存在临床上可用于测量任何实际含有源自真菌的BG的样品(例如血浆)的BG的免疫分析方法。

引文列表

专利文献

专利文献1：日本专利第5089375号

专利文献2：日本专利第3553656号

专利文献3：日本特开平4-346791号

专利文献4：日本专利第5054426号

非专利文献

非专利文献1：Use of beta-1，3-glucan-specific antibody to study thecyst wall of Pneumocystis carinii and effects of pneumocandin B0 analog L-733，560.Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1994Oct；38(10)：2258-2265。

非专利文献2：Plasma(1→3)-β-D-glucan assay and immunohistochemicalstaining of(1→3)-β-D-glucan in the fungal cell walls using a novel horseshoecrab protein(T-GBP)that specifically binds to(1→3)-β-D-glucan.Journal ofClinical Laboratory Analysis 1997Volume 11，Issue 2，104-109。

非专利文献3：A novel monoclonal antibody recognizing beta(1-3)glucansin intact cells of Candida and Cryptococcus.APMIS 2008Oct；116(10)：867-876。