[发明专利]用于提高小RNA提取效率的组合物及方法

说明书

本发明提供一种用于提高小RNA提取效率的试剂，其包含(a)聚乙二醇和(b)四甘醇二甲醚。

技术领域

本发明涉及一种用于提高小RNA(small RNA)提取效率的试剂、并涉及使用该试剂分离RNA的方法。

背景技术

微小RNA(也称微小RNA，即microRNA，下面有时称“miRNA”)是一种长度约为21～25个碱基的小的单链非编码RNA，迄今为止已鉴定出20000多个miRNA(http://mirbase.org/)。已经证实这些miRNA具有通过结合靶mRNA控制mRNA表达的功能，并且它们参与细胞增殖、分化以及凋亡等各种生物学过程。据估计约30％的人类基因表达是通过miRNA调节的。近年来，有人提出miRNA的异常表达会影响包括癌症在内的各种疾病的发生和病理状况(非专利文献1和2)。miRNA存在于细胞分泌的外泌体以及存在于血液和尿液等体液中，因此，通过检测和定量体液中的miRNA来诊断疾病的微创液体活检已引起关注。

作为简单，快速的定量miRNA的方法通常采用实时定量RT-PCR。实时RT-PCR因其可以在短短数小时内获得结果且可以通过简单的设备来实现而成为一种适合临床诊断的方法。在此，为了能够通过实时RT-PCR来检测和定量miRNA，需要高精度和高产率地分离miRNA。作为分离总RNA的方法，通常使用原理为在离液盐存在下将核酸分子吸附在二氧化硅载体上的Boom法(非专利文献3)。然而，在Boom法的通常条件下，只能以低效率提取像miRNA这样的低分子量RNA，所以存在无法获得足够量的用于实时RT-PCR分析的miRNA的问题，因而，需要在如传统方法一样容易提取的同时还能高产率地提取包含miRNA的总RNA的方法。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Ochiya,T.,Drug Delivery System,Vol.26,No.1,pp.10-14(2011)

非专利文献2：Rupaimoole，R.et al，Nat.Rev.Drug Discov.，Vol.16，No.3，pp.203-222(2016)

非专利文献3：Boom，R.et al.，J.Clin.Microbiol.，Vol.28，No.3，pp.495-503(1990)

发明内容

发明所要解决的技术问题

本发明的目的是解决现有技术的问题，并提供一种能够通过安全且简单的操作以高产率和高精度从生物样品中提取miRNA的方法。

解决问题的技术方案

本发明人等反复进行了深入研究的结果发现：通过向包含离液盐的核酸提取物中加入高分子量聚乙二醇可以显著提高Boom法的miRNA提取效率。然而，高分子量聚乙二醇在室温下是固体，并且即使被加热和熔化后也非常粘，因此很难用移液管处理(称重)。

因此，本发明人等认真研究一种既能达到保持高分子聚乙二醇的高效率提取miRNA的效果还具有优异的可操作性的组合物。结果本发明人发现了聚乙二醇和四甘醇二甲醚的混合物具有优异的可操作性和稳定性，并且可以达到与高分子量聚乙二醇同样的高提取miRNA效率。

具体地，基于一实施方式，本发明提供了一种用于提高小RNA提取效率的试剂，其包含以下成分：(a)聚乙二醇，以及(b)四甘醇二甲醚。

优选地，所述聚乙二醇的平均分子量为600～2000。

优选地，所述成分(a)和所述成分(b)的比例为3:7～6:4。

基于所述用于提高小RNA提取效率的试剂，所述成分(a)的含量优选为20～60体积％，并且所述成分(b)的含量优选为25～70体积％。