[发明专利]使用肠杆菌科细菌对醇和胺进行酶促磺酰化的方法

权利要求书

1.用于底物的酶促磺酰化的方法，所述方法包括：

(i)在含有属于肠杆菌科的细菌的培养基中使所述底物与3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应以产生所述底物的硫酸化衍生物，和

(ii)从所述培养基收集所述硫酸化衍生物，

其中所述细菌已经进行了修饰：

(A)以至少产生具有磺基转移酶活性的蛋白质，和

(B)以减弱aphA基因或cysQ基因的表达。

2.根据权利要求1的方法，其中所述进行了修饰以减弱所述aphA基因的表达的细菌已经进行了进一步修饰以减弱所述cysQ基因或cpdB基因或它们的组合的表达。

3.根据权利要求1的方法，其中所述进行了修饰以减弱所述cysQ基因的表达的细菌已经进行了进一步修饰以减弱所述aphA基因或所述cpdB基因或它们的组合的表达。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述具有磺基转移酶活性的蛋白质选自由以下组成的组：具有O-磺基转移酶活性的蛋白质、具有N-磺基转移酶活性的蛋白质和具有N-脱乙酰基酶/N-磺基转移酶活性的蛋白质。

5.根据权利要求4的方法，其中所述具有O-磺基转移酶活性的蛋白质选自由以下组成的组：具有硫酸乙酰肝素2-O-磺基转移酶活性的蛋白质、具有硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶活性的蛋白质、具有硫酸乙酰肝素6-O-磺基转移酶活性的蛋白质，及它们的组合。

6.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中所述细菌已经进行了进一步修饰以产生具有肝素前体(heparosan)-N-硫酸-葡糖醛酸5-差向异构酶活性的蛋白质。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其中所述细菌已经进行了进一步修饰以产生具有3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸-磺基转移酶活性的蛋白质。

8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中所述培养基含有所述具有3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸-磺基转移酶活性的蛋白质。

9.根据权利要求1至8中任一项的方法，其中所述底物至少具有一个选自羟基基团和氨基基团的化学基团。

10.根据权利要求1至9中任一项的方法，其中所述底物选自由以下组成的组：肝素前体、硫酸乙酰肝素和肝素。

11.根据权利要求1至10中任一项的方法，其中所述硫酸化衍生物选自由以下组成的组：肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸胆碱和硫酸皮肤素。

12.根据权利要求1至11中任一项的方法，其中所述细菌属于埃希氏菌属或泛菌属。

13.根据权利要求12的方法，其中所述细菌是大肠杆菌或菠萝泛菌。

14.用于产生底物的硫酸化衍生物的方法，所述方法包括：

(i)在含有属于肠杆菌科的细菌的培养基中使所述底物与3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应以产生所述底物的硫酸化衍生物，和

(ii)从所述培养基收集所述硫酸化衍生物，

其中所述细菌已经进行了修饰：

(A)以至少产生具有磺基转移酶活性的蛋白质，和

(B)以减弱aphA基因或cysQ基因的表达。

15.根据权利要求14的方法，其中所述进行了修饰以减弱所述aphA基因的表达的细菌已经进行了进一步修饰以减弱所述cysQ基因或cpdB基因或它们的组合的表达。

16.根据权利要求14的方法，其中所述进行了修饰以减弱所述cysQ基因的表达的细菌已经进行了进一步修饰以减弱所述aphA基因或所述cpdB基因或它们的组合的表达。