[发明专利]高效表达的EGFR和PD-L1双特异性结合蛋白

说明书

本文公开了同时结合EGFR和PD‑L1的双特异性Fabs‑In‑Tandem免疫球蛋白(FIT‑Ig)结合蛋白。这样的双特异性EGFR/PD‑L1 FIT‑Ig结合蛋白被有效表达并且可用于阻断EGFR信号传导、阻断PD‑L1信号传导以及治疗癌症。

技术领域

本发明涉及识别表皮生长因子受体(EGFR)和程序性死亡配体1(PD-L1)的新的工程化双特异性结合蛋白。该双特异性结合蛋白可用于治疗癌症。

背景技术

程序性死亡配体1(PD-L1)是大小约为40千道尔顿(kD)的I型跨膜糖蛋白。在人类，PD-L1在多种免疫细胞类型上表达，包括活化的和无活性的/衰竭的T细胞、幼稚的和活化的B细胞、髓样树突状细胞(DC)、单核细胞、肥大细胞和其他抗原呈递细胞(APC)。其还在非免疫细胞上表达，包括胰腺的胰岛、肝脏的Kupffer细胞、血管内皮和选定的上皮，例如气道上皮和肾小管上皮，在炎症发作期间其表达会增强。在许多恶性肿瘤中PD-L1也以升高的水平存在，所述恶性肿瘤包括但不限于乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、肺癌、肾癌(包括肾细胞癌)、胃癌、膀胱癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肝细胞癌(HCC)、胰腺癌和黑色素瘤。还已经表明，通过刺激IFN-γ(干扰素gamma)，可上调PD-L1在细胞表面的表达。

PD-L1(CD274，B7-H1)结合程序性细胞死亡蛋白1(PD-1，CD279)，其是CD28受体家族的成员，该受体家族包括CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1和BTLA。PD-1通常在免疫细胞中表达，例如T细胞、B细胞、单核细胞和自然杀伤(NK)细胞。PD-L1和PD-L2(CD273，B7-DC)都是PD-1的细胞表面糖蛋白配体。PD-1与PD-L1或PD-L2的结合启动抑制T细胞活化和细胞因子分泌的信号。这种T细胞活化的下调反过来导致T细胞增殖、IL-2分泌、IFN-γ分泌以及其他生长因子和细胞因子的分泌减少。Freeman等人,J.Exp.Med.,192:1027-1034(2000)；Latchman等人,Nat.Immunol.,2:261-8(2001)；Carter等人,Eur.J.Immunol.,32:634-43(2002)；Ohigashi等人,Clin.Cancer Res.,11:2947-53(2005)。据信通过PD-1/PD-L1相互作用的信号传导通过负调节T细胞应答，在免疫系统内起着至关重要的、非冗余的功能。该调节参与胸腺中T细胞的发育、慢性炎性反应的调节以及外周耐受和免疫赦免的维持。在PD-1缺陷型小鼠中例证了这些功能的关键性质，这些PD-1缺陷型小鼠表现出自身免疫表型。C57BL/6小鼠中的PD-1缺陷导致慢性进行性狼疮样肾小球肾炎和关节炎。在Balb/c小鼠中，由于存在心脏组织特异性自身反应抗体，PD-1缺陷导致严重的心肌病。

已经提出PD-L1通过增加抗原特异性T细胞克隆的凋亡，在肿瘤免疫中发挥作用。Dong等人,Nat.Med.,8:793-800(2002)。此外，已经表明PD-L1可能参与肠粘膜炎症，对PD-L1抑制与结肠炎相关的消耗性疾病进行抑制。Kanai等人,J.Immunol.,171:4156-63(2003)。通常，已经提出了抑制PD-L1信号传导可作为增强T细胞免疫性以治疗癌症(例如肿瘤免疫)和感染的手段，包括急性和慢性(例如持续性)感染。

由于PD-L1、PD-L2和PD-1参与下调免疫应答，包括抑制抗肿瘤免疫应答，其被称为“免疫检查点”蛋白。Pardoll,Nat.Rev.Cancer,12:252-264(2012)。使用免疫检查点抑制剂(例如，靶向PD-1、PD-L1或CTLA-4的抗体)的临床研究已取得了有前景的结果，但是，已经观察到只有一部分患者最初对当前的抑制剂有反应，并且越来越多的临床证据表明相当大比例的初始反应者最终复发，数月或数年后，成为致命的药物抗性疾病。Syn等人,The LancetOncology,18(12):e731–e741(2017)。