[发明专利]用于制造抗体-药物缀合物的有效方法

权利要求书

1.一种用于生产抗体-药物缀合物的方法，其中

由式（1）表示的药物-接头经由硫醚键与抗体缀合

[化学1]

，

其中A表示与抗体的连接位置，

其中所述方法包括以下步骤：

（i）用还原剂还原抗体；

（ii）使由式（2）表示的化合物与步骤（i）中还原的抗体反应

[化学2]

；

（iii）加入具有硫醇基的试剂，以与步骤（ii）中由式（2）表示的残留化合物反应；然后

（iv）通过使用含有由强酸和强碱组成的盐的缓冲溶液，通过超滤去除其中步骤（i）中使用的还原剂加成至由式（2）表示的化合物的马来酰亚胺基产生的化合物、以及其中步骤（iii）中使用的具有硫醇基的试剂加成至由式（2）表示的化合物的马来酰亚胺基产生的化合物。

2.根据权利要求1的生产方法，其中步骤（i）中使用的所述还原剂是三（2-羧乙基）膦或其盐。

3.根据权利要求1的生产方法，其中步骤（i）中使用的所述还原剂是三（2-羧乙基）膦盐酸盐。

4.根据权利要求1至3中任一项的生产方法，其中步骤（i）在缓冲溶液中执行。

5.根据权利要求4的生产方法，其中通过使用磷酸氢二钠的水溶液，将所述缓冲溶液的pH调整至6至8。

6.根据权利要求4或5的生产方法，其中所述缓冲溶液是乙酸盐缓冲溶液。

7.根据权利要求1至6中任一项的生产方法，其中步骤（i）在螯合剂的存在下执行。

8.根据权利要求7的生产方法，其中所述螯合剂是乙二胺四乙酸。

9.根据权利要求4至8中任一项的生产方法，其中步骤（i）中使用的所述缓冲溶液含有表面活性剂。

10.根据权利要求9的生产方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯20。

11.根据权利要求9的生产方法，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯80。

12.根据权利要求1至11中任一项的生产方法，其中步骤（iii）中使用的所述具有硫醇基的试剂是N-乙酰半胱氨酸。

13.根据权利要求1至12中任一项的生产方法，其中步骤（iv）中使用的所述缓冲溶液的pH为约5。

14.根据权利要求1至13中任一项的生产方法，其中步骤（iv）中使用的所述缓冲溶液是组氨酸缓冲溶液。

15.根据权利要求1至14中任一项的生产方法，其中相对于步骤（iv）中使用的缓冲溶液，步骤（iv）中使用的由强酸和强碱组成的所述盐的浓度在0.2重量%至1重量%的范围内。

16.根据权利要求1至14中任一项的生产方法，其中相对于步骤（iv）中使用的缓冲溶液，步骤（iv）中使用的由强酸和强碱组成的所述盐的浓度为约0.5重量%。

17.根据权利要求1至16中任一项的生产方法，其中步骤（iv）中使用的由强酸和强碱组成的所述盐是氯化钠。

18.根据权利要求1至17中任一项的生产方法，其包括在步骤（iv）之后的步骤：

（v）通过使用缓冲溶液的超滤来去除由强酸和强碱组成的所述盐。

19.根据权利要求18的生产方法，其中步骤（v）中使用的所述缓冲溶液的pH在4至6的范围内。