[发明专利]快速热循环方法

权利要求书

1.一种用于进行聚合物酶链反应(PCR)的方法，包括：

使具有第一体积的PCR混合物在扩增容器中进行第一循环数的热循环，所述第一循环数中的每个包括第一循环时间、第一退火温度、第一退火保持时间、第一变性温度和第一变性保持时间，

使所述扩增容器中所述PCR混合物的体积减少至第二体积，所述第二体积小于所述第一体积，以及

使所述第二体积的PCR混合物在所述扩增容器的至少部分中进行第二循环数的热循环，第二循环数中的每个包括第二循环时间、第二退火温度、第二退火保持时间、第二变性温度和第二变性保持时间，所述第二循环时间短于所述第一循环时间，并且所述第二变性温度低于所述第一变性温度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一变性保持时间长于所述第二变性保持时间。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一退火保持时间长于所述第二退火保持时间。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增容器是可压缩的，并且使所述PCR混合物的体积减少通过从所述扩增容器中排出样品的部分来进行。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增容器与至少两个温度区接触，并且所述热循环过程中的至少一个包括在所述温度区之间移动所述样品。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增容器通过在几个温度之间热循环的加热器加热。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一循环数具有第一升温速率，并且所述第二循环数具有第二升温速率，其中，所述第二升温速率快于所述第一升温速率。

8.根据权利要求1所述的方法，还包括：

使所述扩增容器中所述PCR混合物的体积减少至第三体积，所述第三体积小于所述第二体积，以及

使所述第三体积的PCR混合物在所述扩增容器的至少部分中进行第三循环数的热循环，所述第三循环数中的每个具有第三循环时间，所述第三循环时间短于所述第二循环时间。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述第一循环数具有第一升温速率，所述第二循环数具有第二升温速率，并且所述第三循环数具有第三升温速率，其中，所述第三升温速率快于所述第二升温速率，并且所述第二升温速率快于所述第一升温速率。

10.根据权利要求1所述的方法，还包括在进行第一循环数的热循环之前进行初始循环，所述初始循环包括初始循环时间、初始退火温度、初始变性温度和初始变性保持时间，其中所述初始变性保持时间长于所述第一变性保持时间，并且所述初始变性温度低于所述第一变性温度。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增容器中所述第一体积的PCR混合物在仪器的扩增区中进行热循环，并且所述方法还包括在将所述第一体积的PCR混合物放入所述扩增区之前，对所述扩增区进行预热。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增容器中所述第一体积的PCR混合物在仪器的扩增区中进行热循环，所述扩增区由一个或多个加热器加热，还包括在使所述PCR混合物的体积减少至所述第二体积的同时或之后，减少所述一个或多个加热器的热质量。

13.根据权利要求1所述的方法，还包括：

通过将包含核酸的样品与PCR主混合物混合来形成所述第一体积的PCR混合物，其中，所述PCR主混合物在混合之前加热至高于所述第一退火温度。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，在使所述样品与所述PCR主混合物混合之前将所述样品加热至至少50℃。