[发明专利]细胞工程平台

说明书

本发明主题内容提供了一种诊断和临床应用规模的细胞工程平台，用于将有效载荷/货物化合物和组合物无载体传递或者病毒传递到非粘附细胞中。该平台可以实现快速的向一个封闭系统中传递大量细胞。这里还描述了相关的仪器、系统、技术、物品和组合物。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年6月1日递交的美国临时专利申请第62/679,715号的优先权，该专利的全部内容通过引证在此并入本文。

技术领域

这里所述的主题内容指的是不利用载体传递的细胞工程平台。

背景技术

不同细胞类型间细胞转染效率存在差异。悬浮细胞，如非贴壁细胞的转染已被证明是非常困难的使用传统方法，特别是在成规模使用时。

发明内容

本发明主题内容提供了一种细胞工程平台，该平台可将有效载荷/货物化合物和组合物进行无载体传递递送到非粘附细胞中的技术进行缩放。该平台可以实现对大量细胞的快速传送。例如，该平台的一些实施方案可以在一次用于诊断和治疗用途时传送到10⁷到10⁹个或更多个细胞。该平台可以是一个封闭的系统，能够实现无菌转染，可以将mRNA和RNP(核糖核蛋白颗粒)传递到原代T细胞，使用方便，可重复传递等。

通过执行以下步骤：提供非粘附细胞群并使细胞群与一定体积的水溶液接触，所述水溶液包括有效载荷和浓度大于2％(v/v)的醇，通过这些步骤本发明的平台可以实现有效载荷在非粘附细胞的质膜上的传递。例如，所述醇包括乙醇，例如大于5％的乙醇。在一些实施例中，水溶液包含5-30％乙醇，例如12％或25％乙醇。其他组合也是可以的。

在一个方面中，这里公开了一种方法，该方法包括用细胞和第一介质的混合物填充细胞工程平台的一个腔室，并从该腔室排出第一培养基以使混合物通过过滤器，从而使细胞沉积在过滤器上。所述细胞工程平台可包括腔室、设置在所述腔室的第一端的盖、设置在所述腔室的第二端的底座以及设置在所述腔室内的过滤器支架。

以下一个或多个特征可以包含在任何可行的组合中。该方法可以包括将含有渗透剂和有效载荷的传递溶液喷洒到沉积在过滤器上的细胞上。所述方法可包括在所述腔室中施加停止溶液。所述方法还可以进一步包括用第二培养基填充所述腔室以使所述细胞从所述过滤器中再悬浮。被排出的第一培养基可重复用作第二培养基。所述方法可以包括搅动所述腔室。所述方法可包括从所述腔室中提取再悬浮细胞。通过泵和控制器可以自动完成对腔室的填充。该方法可包括在腔室中培养细胞。可通过向所述腔室提供正压力来从所述腔室中排出所述第一培养基。作为选择或另外地，可通过重力从腔室中排出第一培养基。此外，可以施加停止溶液来清洗细胞。用第二培养基填充所述腔室可以作为细胞洗涤过程、细胞浓度改变过程和/或细胞培养基改变过程来执行。

在另一方面，一种系统包括一个外壳，该外壳被配置成接收滤板，所述滤板上包含孔；一个压差施加器，其被配置成向所述孔中施加不同的压力；一个传递溶液施加器，其被配置用于向孔中输送雾化的传递溶液；一个停止溶液施加器，其配置为将停止溶液输送至所述孔；以及一个培养基施加器，所述培养基施加器被配置为将所述培养基输送至所述孔中。

以下一个或多个特征可以被包含在任何可行的组合中。所述外壳可以包括腔室、设置在所述腔室的第一端的盖和设置在所述腔室的第二端的底座。所述滤板可设置在所述腔室内。所述压差施加器可以连接到所述壳体的盖上并且包括淋浴头，所述淋浴头在所述淋浴头的端部具有多个孔。所述停止溶液施加器可通过设置在所述外壳盖中的隔膜将所述停止溶液传递至孔中。所述培养基施加器可通过设置在所述壳体盖中的隔膜或通过所述腔室的端口将所述培养基输送至所述孔中。外壳可配置为倾斜滤板。所述传递溶液施加器可包括机械臂和喷头，所述机械臂与所述喷头磁耦合。该系统可以包括一个软弹性屏障，包围过滤板和喷头。软弹性屏障将机械臂和喷头分开。机械臂被配置成将喷头运送到滤板上的多个位置。停止溶液施加器和培养基施加器作为端口在外壳内形成一体，并且所述外壳形成容器。该容器包括一个用于收集废培养基的废培养基出口。