[发明专利]用于检测抗药抗体的方法

说明书

在某些实施方案中，本发明提供了一种用于检测样品中的抗药抗体(ADA)的方法，其包括：a)在高温下预处理所述样品以解离所述样品中的ADA:药物免疫复合物；b)通过基质从所述样品中分离出所述ADA；c)使用缓冲液从所述基质中回收所述ADA；以及d)在基于细胞的测定或体外测定中检测所述ADA。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年8月3日提交的美国临时申请号62/714,183的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。

背景技术

生物治疗剂是外来抗原，并且可能潜在地诱导免疫反应，从而导致抗药抗体(ADA)的形成，这进而可能导致广泛的副作用。中和抗体(NAb)属于ADA的一个子集，其可以与治疗剂的药理活性区域结合，以抑制或完全中和其临床功效。优选基于细胞的功能性NAb测定来表征其中和活性。然而，基于细胞的NAb测定通常容易受到药物干扰以及众多血清因子(包括但不限于生长因子和疾病相关细胞因子)干扰的影响。珠提取与酸解离(BEAD)已经成功应用于从人血清样品中去除循环药物和/或其他干扰因子，从而富集ADA/NAb。然而，提取程序中使用的强酸可能引起NAb的不可逆变性，并且导致NAb测量值被低估。因此，需要开发用于检测中和抗药抗体的新颖方法。

发明内容

在某些实施方案中，本发明提供了一种用于检测样品中的抗药抗体(ADA)的方法。这样的方法包括：a)在高温下预处理所述样品以解离所述样品中的ADA:药物免疫复合物；b)通过基质从所述样品中分离出所述ADA；c)使用缓冲液从所述基质中回收所述ADA；以及d)在基于细胞的测定或体外测定中检测所述ADA。任选地，所述高温在60℃与68℃之间(例如，约60℃、约61℃、约62℃、约63℃、约64℃、约65℃、约66℃、约67℃或约68℃)。任选地，将所述样品在所述高温下预处理约30分钟与约2小时之间的时间(例如，约30-60分钟)，如约30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115或120分钟。

在某些特定的实施方案中，所述ADA对酸处理敏感。在某些特定的实施方案中，所述药物具有比所述ADA低的热稳定性。

任选地，所述药物选自抗体或其片段、核酸、肽、多肽、拟肽、碳水化合物、脂质或小分子化合物。任选地，所述样品是选自以下的生物样品：体液、粘液分泌物、唾液、血液、全血、血浆和血清。任选地，所述样品来自已经用所述药物治疗过的受试者。

在某些特定的实施方案中，通过与生物素化的药物接触，然后与链霉亲和素包被的基质接触，从所述样品中分离出所述ADA。可替代地，通过与所述药物偶联的基质从所述样品中分离出所述ADA。例如，所述基质是磁珠。

在某些特定的实施方案中，在基于细胞的测定中检测所述回收的ADA。例如，这样的测定包括：i)在所述药物的存在下将所述回收的ADA添加到细胞中；以及ii)通过测量所述药物对所述细胞的活性降低来检测所述ADA。

在某些特定实施方案中，在体外测定中检测所述回收的ADA。例如，这样的测定包括：i)使所述回收的ADA与用可检测标记物标记的所述药物接触；以及ii)通过测量所述可检测标记物来检测所述ADA。举例而言，所述可检测标记物是选自以下的标记物：放射性同位素、酶、荧光标记物、化学发光标记物和电化学发光标记物以及用于酶促检测反应的底物。

在某些特定的实施方案中，所述药物是抗体片段，如结构域抗体。在某些特定的实施方案中，所述药物是聚乙二醇化的。

在某些特定的实施方案中，所述药物是鲁利珠单抗(lulizumab)(即，聚乙二醇化的抗CD28结构域抗体)。例如，在约62℃的高温下预处理此药物。例如，在所述血清样品中检测所述ADA。

附图说明