[发明专利]蛋白质和肽的纯化方法

权利要求书

1.包含与二羧酸酐部分连接的生物正交偶联对的成员的化合物。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述生物正交偶联对的成员是IEDDA偶联对的贫电子二烯或富电子亲二烯体成员，诸如四嗪，例如1,2,4,5-四嗪部分或4-(1,2,4,5-四嗪基)苯基部分，或应变环烯烃，例如TCO。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述二羧酸酐部分是马来酸酐部分。

4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述生物正交偶联对的成员是四嗪部分，例如1,2,4,5-四嗪部分或4-(1,2,4,5-四嗪基)苯基部分。

5.根据权利要求4所述的化合物，具有以下结构：

其中

R₁和R₂独立地为H或C_1-3烷基，且L是惰性接头。

6.根据权利要求5所述的化合物，其中所述接头包含苯基。

7.根据权利要求6所述的化合物，具有以下结构：

其中L’为惰性接头。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的化合物，其中R₁为甲基。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的化合物，其中R₂为甲基。

10.根据权利要求5-9中任一项的化合物，其中R₁和R₂均为甲基。

11.根据权利要求5-10中任一项所述的化合物，其中L包含PEG_2-10基团。

12.根据权利要求1所述的化合物，具有以下结构：

其中n为2-10。

13.根据权利要求12所述的化合物，其中n是4。

14.修饰的胰蛋白酶多肽，包含：

胰蛋白酶多肽；

连接于所述胰蛋白酶多肽的生物素部分；和

连接于所述胰蛋白酶多肽的包含生物正交偶联对的成员的基团，

其中所述胰蛋白酶多肽上包含生物正交偶联对的成员的基团与生物素部分的比例为1:4至1:6。

15.根据权利要求14所述的修饰的胰蛋白酶多肽，包含：

连接于所述胰蛋白酶多肽的NHS-生物素残基；和

连接于所述胰蛋白酶多肽的NHS-四嗪残基，

其中所述胰蛋白酶多肽上NHS-四嗪残基与NHS-生物素残基的比例为1:4至1:6。

16.根据权利要求15所述的修饰的胰蛋白酶多肽，其中所述NHS-四嗪残基具有以下结构：

其中L和L’为惰性接头，且R₂为H或C_1-3烷基，n为2-10。

17.纯化多肽的方法，包括：

使包含多肽的碱性pH的样品与一定量的包含部分的偶联化合物混合，所述部分包含通过接头与马来酸酐部分连接的生物正交偶联对的第一成员；

使所述样品中的多肽与连接于基质的生物正交偶联对的第二成员偶联；

任选地洗涤与所述基质结合的多肽，以从结合基质的多肽中去除任何未结合的物质；和

在酸性pH的洗脱溶液中从所述基质中洗脱所述多肽。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述碱性pH为7至10，或为8-9.5，和/或所述酸性pH为2至7，或为2.5-6。