[发明专利]作为用于自体免疫疾病及IL-17相关疾病的生物标记及治疗标靶的AhR-ROR-γt复合体

权利要求书

1.一种用于识别AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的抑制剂的方法，其包括：

(a)提供细胞培养物，其中所述培养物中的细胞表达芳烃受体(AhR)蛋白质及磷酸-视黄酸受体相关孤儿核受体γt(RORγt)蛋白质；

(b)在测试剂的存在下培育所述细胞培养物；

(c)在所述测试剂的存在下，分析所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的含量；

(d)比较在所述测试剂的存在下所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体与对照的含量；及

(e)当所述比较步骤指示与所述对照相比，在所述测试剂的存在下所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的含量降低时，识别所述测试剂为所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的抑制剂。

2.如权利要求1的方法，其中所述分析步骤是使用抗磷酸-RORγt[Ser489]抗体进行免疫印渍。

3.如权利要求1的方法，其中这些细胞是选自由以下组成的群：Lck-GLK转殖基因小鼠的T细胞、过度表达GLK的T细胞、TCR活化的T细胞及过度表达AhR+RORγt+IKKβ的细胞。

4.如权利要求1的方法，其中：

(i)所述提供步骤是提供经以CFP-AhR、YFP-RORγt及IKKβ质粒共转染的细胞；

(ii)所述分析步骤是进行萤光共振能量转移(FRET)分析；及

(iii)当所述比较步骤指示与所述对照相比，在所述测试剂的存在下通过YFP-RORγt发射的萤光强度降低时，所述识别步骤识别所述测试剂为所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的抑制剂。

5.如权利要求1的方法，其中：

(i)所述提供步骤是提供经以抗原决定基标记的AhR、Myc-RORγt及IKKβ质粒共转染的细胞；

(ii)使用ALPHA分析利用抗Myc抗体结合的接受体珠((acceptor bead)及涂抗抗原决定基抗体的供体珠进行所述分析步骤；

(iii)当所述比较步骤指示与所述对照相比，在所述测试剂的存在下通过所述抗Myc抗体结合的接受体珠发射的信号减少时，所述识别步骤识别所述测试剂为所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的抑制剂；

其中所述抗原决定基由SEQ ID NO:1的序列组成。

6.如权利要求1的方法，其中：

(i)所述提供步骤提供选自由以下组成的群的细胞：Lck-GLK转殖基因小鼠的T细胞、过度表达GLK的T细胞、TCR活化的T细胞及过度表达AhR+RORγt+IKKβ的细胞；

(ii)所述分析步骤进行原位邻近接合分析(PLA)，其将作为初级抗体、二级抗体的抗AhR抗体及抗RORγt或抗磷酸-RORγt[Ser489]抗体用作PLA探针及萤光标记的互补寡核苷酸探针用于信号侦测；及

(iii)当所述比较步骤指示与所述对照相比，在所述测试剂的存在下存在萤光信号减少时，所述识别步骤识别所述测试剂为所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的抑制剂。

7.如权利要求1的方法，其中：

(i)所述提供步骤是提供经以Myc-AhR、抗原决定基标记的RORγt及IKKβ质粒共转染的细胞；

(ii)所述分析步骤是进行共免疫沉淀分析，其是通过将细胞提取物与抗抗原决定基琼脂糖珠或抗Myc琼脂糖珠培育从而沉淀出所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体并将经以抗Myc或抗抗原决定基抗体免疫沉淀的所述AhR-磷酸-RORγt复合体进行免疫印渍；及

(iii)当所述比较结果指示与所述对照相比，在所述测试剂的存在下存在信号的减少时，所述识别步骤识别所述测试剂为所述AhR-磷酸-RORγt蛋白质复合体的抑制剂；

其中所述抗原决定基由SEQ ID NO:1的序列组成。