[发明专利]嵌合生长因子受体

说明书

过继性细胞疗法涉及将自体或同种异体细胞转移到患者以试图治疗各种疾病。在免疫疗法领域，在回输之前，肿瘤特异性T‑细胞可以离体生长，或经由基因工程方法被植入肿瘤特异性。T‑细胞输注需要预适应治疗，并且通常需要输注后IL‑2治疗，以试图增强持久性和移植。在本文中我们示出T‑细胞可以经工程改造以表达嵌合重组生长因子受体(CrGFR)，其允许在施用临床上可用的药物艾曲波帕时T‑细胞的选择性存活和/或扩增。

背景技术

利用自体T-细胞介导癌症消退的过继性细胞疗法(ACT)已经在早期临床试验中表现得很有希望。已经采用了若干种一般方法，例如，使用天然存在的离体扩增的肿瘤反应性或肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。此外，T-细胞可以经基因修饰以使它们重新靶向限定的肿瘤抗原。这可以通过肽(p)-主要组织相容性复合物(MHC)特异性T-细胞受体(TCR)或者肿瘤特异性单链抗体片段(scFv)和T-细胞信号结构域(例如CD3ζ)之间的合成融合体的基因转移进行，所述合成融合体被称为嵌合抗原受体(CAR)。TIL和TCR转移已经被证明在靶向黑色素瘤时特别有效(Rosenberg等人，2011；Morgan 2006)，而CAR疗法已经在治疗某些B-细胞恶性肿瘤中表现得大有希望(Grupp等人，2013)。

ACT的目前一般治疗方案需要在回输离体生长的细胞之前使用环磷酰胺和/或氟达拉滨(其除去患者中的大多数循环淋巴细胞)进行初始的非脊髓抑制性预适应治疗。这为新细胞扩增留出空间并且消除潜在的“细胞因子阱(cytokine sinks)”，由此正常细胞与新输注的细胞竞争生长和存活信号。与所述细胞一起，患者通过输注有助于新细胞移植和扩增的高剂量的白介素(IL)-2接受细胞因子支持剂(support)。

存在着多种因素目前限制了T-细胞ACT技术。现有的上述预适应疗法需要住院并且潜在地使患者处于免疫减弱的状态。此外，许多患者的健康状态不足以能够承受此治疗方案的艰辛。除了预适应之外，IL-2用作支持性疗法与严重的毒性和潜在的特别护理治疗相关联。实际上，TIL疗法本身，不同于TCR和CAR疗法，尚未与任何严重的中靶或脱靶的毒性相关联，大多数毒性事件与伴随的IL-2输注相关联。

可以最小化或减少预适应和IL-2支持性治疗的方法将具有的主要益处在于它们将：(i)减少患者住院治疗，(ii)增大可被ACT治疗的潜在患者的比例，(iii)降低与大量住院相关联的临床成本，因此，又带来了ACT用于更多患者的可能性。

因此，需要新的ACT疗法，其最小化对预适应治疗和/或IL-2支持性治疗的需求。

本发明使用表达重组嵌合生长因子受体的细胞，该重组嵌合生长因子受体可以通过施用CrGFR的配体(该配体可以是临床验证的药物)而被打开或关闭。这允许靶细胞在体内扩增而对其他细胞毒性最小。

许多报告已经采用生长因子受体工程用作扩增某些细胞群的手段或用于开发对抗体工程策略的筛选过程的构思。例如，许多报告已经表明抗体-TpoR或EpoR融合体可以用于多种生物技术策略，例如单链抗体选择(Ueda等人，2000,Kawahara等人，2004)，并且许多报告已经表明生长因子受体融合体可以成功地扩增巨核细胞细胞系Ba/F3和/或造血干细胞(Jin等人，2000；Richard等人，2000；Nagashima等人，2003；Kawahara等人，2011；Saka等人，2013)。

血小板生成素(Tpo)受体(TpoR；CD110,c-mpl)通常在巨核细胞谱系的细胞中表达。在它的正常状态下，TpoR响应于血小板生成素而被开启，由此导致血小板的巨核细胞产生。还存在活性负反馈环，通过其血小板表达TpoR可以用作阱来减少Tpo的循环水平。重要地，TpoR没有在任何其他正常组织或癌症细胞上被表达(Columbyova 1995)。