[发明专利]包含嗅神经细胞或其前体细胞的细胞团块及其制备方法

权利要求书

1.包含嗅神经细胞或其前体细胞的细胞团块的制备方法，所述方法包括下述步骤(1)～(3)：

步骤(1)，将多潜能干细胞在第一Wnt信号转导途径抑制物质的存在下悬浮培养，形成细胞聚集体，

步骤(2)，在BMP信号转导途径作用物质的存在下悬浮培养所述步骤(1)中得到的细胞聚集体，

步骤(3)，将所述步骤(2)中得到的细胞聚集体进行悬浮培养，得到所述细胞团块，

其中，该步骤(3)包含选自由下列步骤组成的组中的至少一个步骤，

步骤(3a)，在FGF信号转导途径作用物质的存在下进行悬浮培养，

步骤(3b)，在BMP信号转导途径抑制物质的存在下进行悬浮培养，及

步骤(3c)，在FGF信号转导途径作用物质及BMP信号转导途径抑制物质的存在下进行悬浮培养。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述步骤(3)包含所述步骤(3a)，且在所述步骤(3a)后进一步包含所述步骤(3c)。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，所述步骤(3)包含所述步骤(3b)或所述步骤(3c)，且在所述步骤(3b)或所述步骤(3c)后，进一步包含在不存在BMP信号转导途径抑制物质的条件下进行悬浮培养的步骤(3d)。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的制备方法，其中，在所述步骤(3)中，还存在EGF信号转导途径作用物质。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的制备方法，其中，在所述步骤(1)前进一步包含步骤(a)，所述步骤(a)为将所述多潜能干细胞在不存在饲养细胞的条件下，以包含1)选自由TGFβ家族信号转导途径抑制物质及sonic hedgehog信号转导途径作用物质组成的组中的至少1个，和2)未分化维持因子的培养基进行培养的步骤。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的制备方法，其中，所述BMP信号转导途径作用物质包含选自由BMP2，BMP4，BMP7，BMP13及GDF7组成的组中的至少1个蛋白质。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的制备方法，其中，所述步骤(3)包含选自由所述步骤(3a)及所述步骤(3c)组成的组中的至少1个步骤，且所述FGF信号转导途径作用物质包含选自由FGF2及FGF8，以及它们的变体组成的组中的至少一种。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的制备方法，其中，所述步骤(3)的开始时期为从添加所述步骤(2)的BMP信号转导途径作用物质起12小时以后到72小时以内。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的制备方法，其中，在选自由所述步骤(2)及所述步骤(3)组成的组中的至少1个步骤中，存在所述第一Wnt信号转导途径抑制物质。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的制备方法，其中，所述第一Wnt信号转导途径抑制物质包含具有对于非经典的Wnt途径的抑制活性的物质。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的制备方法，其中，所述第一Wnt信号转导途径抑制物质包含PORCN抑制剂。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的制备方法，其中，所述第一Wnt信号转导途径抑制物质包含选自由KY02111及KY03-I组成的组中的至少一种。

13.根据权利要求1～12中任一项所述的制备方法，其中，所述步骤(3)包含选自由所述步骤(3b)及所述步骤(3c)组成的组中的至少1个步骤，且所述BMP信号转导途径抑制物质包含I型BMP受体抑制剂。