[发明专利]利用肽标签的蛋白质可溶性表达

说明书

通过将目的蛋白与具有下述氨基酸序列的肽标签连接并表达，将目的蛋白高效蓄积在可溶性级分中：X(PY)_qPZ，P表示脯氨酸，X表示由0～5个氨基酸组成的氨基酸序列，所述氨基酸独立选自由精氨酸(R)，甘氨酸(G)，丝氨酸(S)，赖氨酸(K)，苏氨酸(T)，亮氨酸(L)，天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)及甲硫氨酸(M)组成的组，Y表示由1～4个氨基酸组成的氨基酸序列，所述氨基酸独立选自由R，G，K，T，L，N，Q及M组成的组，q表示1～10的整数，Z表示由0～10个氨基酸组成的氨基酸序列，所述氨基酸独立选自由R，G，S，K，T，L，N，Q及M组成的组，在所述肽标签的氨基酸序列中，Q，M，L，N及T合计包含3个以上。

技术领域

本发明涉及重组蛋白质的生产技术，更具体地，涉及将重组蛋白质高效地表达在可溶性级分中的技术。

背景技术

随基因重组技术的发展，实现了将源自高等生物的有用蛋白质利用大肠杆菌、酵母等进行异种表达的可能。现在，异种表达的有用蛋白质的生产更已达到了广泛使用技术的地位。作为提高有用蛋白质的表达，蓄积量的对策，研究了启动子及终止子的选择，翻译增强子的利用，导入基因的密码子改变，蛋白质的细胞内输送及局域化等。另外，除此以外，还开发了多个通过使肽标签连接于有用蛋白质上而提高其表达的技术。例如，在专利文献1中，公开了通过使ENTROPIC BRISTLE DOMAIN(EBD)肽连接于有用蛋白质上而表达，从而提高有用蛋白质在可溶性级分中的表达。然而，由于EBD肽中的脯氨酸和脯氨酸之间包含丝氨酸，因此，存在产生的蛋白质的总产量变低的担忧。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利公开20090137004号公报

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的课题在于，在基因重组蛋白质生产技术中，在可溶性级分中高效产生目的蛋白。

解决问题的手段

本发明人为了解决上述课题进行了深入研究。结果发现，通过使用具有下述氨基酸序列的肽标签，目的蛋白在可溶性级分中的表达量显著提高。即，通过锐意改变被连接的肽标签的氨基酸组成及序列，在保持目的蛋白的表达量的同时，飞跃性地提高了在可溶性级分中的表达量，取得了成功。本发明是基于这样的见解而完成的。

本发明的要点如下所述。

[1]在导入有编码融合蛋白的多核苷酸的表达体系中，产生来自所述多核苷酸的所述融合蛋白并蓄积所述融合蛋白而成的可溶性级分，所述融合蛋白包含目的蛋白以及与该目的蛋白连接的含有下述氨基酸序列的肽标签，

X(PY)_qPZ

P表示脯氨酸，

X表示由0～5个氨基酸组成的氨基酸序列，所述氨基酸独立选自由精氨酸(R)，甘氨酸(G)，丝氨酸(S)，赖氨酸(K)，苏氨酸(T)，亮氨酸(L)，天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)及甲硫氨酸(M)组成的组，

Y表示由1～4个氨基酸组成的氨基酸序列，所述氨基酸独立选自由R，G，K，T，L，N，Q及M组成的组，

q表示1～10的整数，Z表示由0～10个氨基酸组成的氨基酸序列，所述氨基酸独立选自由R，G，S，K，T，L，N，Q及M组成的组，

在所述肽标签的氨基酸序列中，Q，M，L，N及T合计包含3个以上。

[2]根据[1]所述的可溶性级分，其中，PY为选自PGQ，PGM，PGT，PGL，PQQ，PGN，PGQG，PGMG，PGTG，PGLG，PGNG，PQQQ中的1种以上。

[3]根据[1]或[2]所述的可溶性级分，其中，所述肽标签的长度为10～30个氨基酸。