[发明专利]荧光素生物合成酶及其用途

权利要求书

1.一种真菌荧光素生物合成蛋白，其选自下组：

(a)牛奶树碱羟化酶，其具有在至少350个氨基酸内与选自下组SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28的氨基酸序列具有至少60％同一性的氨基酸序列，或包含被非保守氨基酸插入片段分隔的SEQ ID NOs 29-33的共有序列，该牛奶树碱羟化酶催化6-(2-芳基乙烯基)-4-羟基-2H-吡喃-2-酮，其具有结构式

转化为6-(2-芳基乙烯基)-3,4-二羟基-2H-吡喃-2-酮，其具有结构式

其中R是芳基或杂芳基；

(b)牛奶树碱合酶，其具有与选自下组SEQ ID NO：35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55的氨基酸序列具有至少45％同一性的氨基酸序列，或包含被非保守氨基酸插入片段分隔的SEQ ID NO 56-63的共有序列，该牛奶树碱合酶催化3-芳基丙烯酸，其具有结构式

其中R是芳基或杂芳基，转化为6-(2-芳基乙烯基)-4-羟基-2H-吡喃-2-酮，其具有结构式

其中R是芳基或杂芳基；

(c)咖啡酰丙酮酸羟化酶，其具有与选自下组SEQ ID NO：65、67、69、71、73、75的氨基酸序列具有至少60％同一性的氨基酸序列，或包含被非保守氨基酸插入片段分隔的SEQ IDNO 76-78的共有序列，该咖啡酰丙酮酸羟化酶催化6-芳基-2-羟基-4-氧代己-2,5-二烯酸，其具有结构式

其中R是芳基或杂芳基，转化为3-芳基丙烯酸，其具有结构式

2.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述牛奶树碱羟化酶的氨基酸序列与选自下组SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28的氨基酸序列具有至少65％的同一性、或至少70％的同一性、或至少75％的同一性、或至少80％的同一性、或至少85％的同一性、或至少90％同一性、或至少95％同一性。

3.根据权利要求2所述的蛋白质，其特征在于，所述牛奶树碱羟化酶的氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28，或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％或99％的同一性。

4.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述牛奶树碱合酶的氨基酸序列与选自下组SEQ ID NO：35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55的氨基酸序列具有至少50％的同一性、或至少55％的同一性、或至少60％的同一性、或至少65％的同一性、或至少70％的同一性、或至少75％的同一性、或至少80％的同一性、或至少85％的同一性、或至少90％的同一性、或至少95％的同一性。

5.根据权利要求4所述的蛋白质，其特征在于，所述牛奶树碱合酶的氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55，或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％或99％的同一性。

6.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述咖啡酰丙酮酸水解酶的氨基酸序列与选自下组SEQ ID NO：65、67、69、71、73、75的氨基酸序列具有至少65％的同一性、或至少70％的同一性、或至少75％的同一性、或至少80％的同一性、或至少85％的同一性、或至少90％同一性、或至少95％同一性。

7.根据权利要求6所述的蛋白质，其特征在于，所述咖啡酰丙酮酸合酶的氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：65、67、69、71、73、75，或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、98％或99％的同一性。