[发明专利]用于亲和毛细管电泳的系统和方法

说明书

本公开的主题涉及在多肽(例如多亚基蛋白)的复杂混合物中筛选一种或多种多肽的组合物、系统和方法。例如，所述主题涉及与亲和毛细管电泳结合使用的配体，以及用于检测包括多特异性抗体(例如双特异性抗体)的多聚体混合物中的多肽的方法和系统。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求于2018年9月10日提交的美国临时专利申请系列第62/729,384号的优先权，该美国临时专利申请的内容全文以引用方式合并于本文。

技术领域

当前公开的主题涉及在多肽的复杂混合物中筛选一种或多种多肽的组合物、系统和方法。特别地，本文公开的主题涉及与亲和毛细管电泳结合使用的配体，以及用于检测包括多特异性抗体(例如双特异性抗体)的多聚体混合物中的多肽的方法和系统。

背景技术

由于双特异性抗体(BsAb)识别两个不同抗原靶的独特能力，近年来引起了广泛的治疗兴趣。尽管关注BsAb的治疗用途，但是其商业生产一直颇具挑战性，因为常规的生产方法会导致不良的副产物并需要复杂的纯化过程。例如，已通过杵臼结构(knob-into-hole)技术生成某些BsAb，从而在重链的CH3结构域中产生互补突变，以形成“突起”(knob)和“孔”(hole)结构。与常规抗体的生产可以依靠相同的重链/轻链亚基的二聚化不同，当使用杵臼结构技术时，将大的氨基酸侧链引入重链之一的CH3结构域并且那些侧链适配至另一条重链的CH3结构域中适当设计的腔中。可以观察到链错配(例如，相同的重链肽的均二聚化或不适当的重链/轻链缔合)，导致产生一组独特的产品相关杂质，包括突起-突起和孔-孔同源二聚体(HD)两种。这些同源二聚体变体可能难以定量，因为它们可能以低水平存在并且具有与预期的BsAb产物和其他BsAb分子变体高度相似的理化特性。

因此，仍然需要从不期望的蛋白产生中纯化和定量靶BsAb的系统和技术。

发明内容

当前公开的主题涉及在多肽的复杂混合物中筛选一种或多种多肽的组合物、系统和方法。特别地，本文公开的主题涉及与亲和毛细管电泳结合使用的配体，以及用于检测包括多特异性抗体(例如双特异性抗体)的多聚体混合物中的多肽的方法和系统。

在某些实施例中，本公开涉及用于在样品中分离多亚基蛋白的系统，该系统包括：a)配体，b)背景电解质缓冲液，c)样品，d)毛细管，e)在毛细管的一端处或毛细管的一端附近的阳极，以及f)在毛细管的另一端处或毛细管的另一端附近的阴极，其中样品与配体混合以形成至少一种配体-蛋白复合物，并在毛细管的阳极端装载至毛细管中，并且其中毛细管填充有与配体混合的背景电解质缓冲液。

在某些实施例中，本公开的系统进一步包括位于毛细管的阴极端附近的检测器，其中该检测器检测210nm至220nm光吸收度或激光诱导荧光。

在某些实施例中，本公开的系统包括样品，其中该样品包含至少一种同源二聚体、至少一种异源二聚体、或其组合。在某些实施例中，本公开的系统包括第一配体-蛋白复合物，其在配体与所述至少一种异源二聚体的第一亚基结合且不与所述至少一种异源二聚体的第二亚基结合时形成。在某些实施例中，本公开的系统包括第二配体-蛋白复合物，其在配体与同源二聚体的至少两个相同的第一或第二亚基结合时形成。在某些实施例中，所述至少一种配体-蛋白复合物配置成在该配体与多亚基蛋白的亚基结合时具有荧光(或其他的可检测的)标记、或改变的电荷、质量、流体动力学大小、电泳迁移率或其组合。在某些实施例中，第二配体-蛋白复合物与第一配体-蛋白复合物相比具有更低的电泳迁移率。

在某些实施例中，本公开的系统包括配体，其中该配体为多肽或多肽片段。在某些实施例中，该配体为荧光标记的多肽或荧光标记的多肽片段。在某些实施例中，该配体选自由以下项组成的组：人CD3多肽、小鼠CD3多肽、大鼠CD3多肽、兔CD3多肽和食蟹猴CD3多肽。在某些实施例中，通过向配体的非结合区添加一种或多种氨基酸来修饰配体。在某些实施例中，所述一种或多种氨基酸选自由以下项组成的组：谷氨酸、天冬氨酸及其组合。在某些实施例中，添加的一种或多种氨基酸配置成改变配体的电荷和质量。